弥漫大B细胞淋巴瘤中肿瘤微环境的空间分析揭示了具有临床意义的细胞相互作用及反复出现的细胞邻域 开放获取

《Cancer Immunology Research》：Spatial Analysis of the Tumor Microenvironment in Diffuse Large B-cell Lymphoma Reveals Clinically Relevant Cell Interactions and Recurrent Cellular Neighborhoods Open Access

肿瘤微环境单细胞分析揭示弥漫大B细胞淋巴瘤中细胞互作与空间组织对预后的影响。通过多色免疫荧光分析99例患者的118万细胞，识别17种细胞表型和10个复现性细胞邻居区（RCN），发现免疫贫乏区（RCN5）与PD-L1+ M2型肿瘤相关巨噬细胞区（RCN10）的空间邻近性显著改善生存率，而B细胞与PD-1+ T细胞互避与良好预后相关。

　　这项研究聚焦于弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）肿瘤微环境（TME）的组成及其空间组织方式，并探索这些特征如何影响患者的预后。通过使用多重免疫荧光（mIF）技术、细胞表型分析以及邻近区域分析，研究人员对来自99名患者的一共1,218,756个单细胞进行了深入分析，从而揭示了DLBCL中不同的细胞表型和反复出现的细胞邻近区域（RCN）分布。这些发现为DLBCL的临床预后提供了新的视角，并提出了可能的治疗方向。

### 肿瘤微环境的细胞组成

研究团队发现，DLBCL患者的TME中存在17种不同的细胞表型，涵盖了不同的B细胞、T细胞以及肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。在所有分析的样本中，B细胞的比例最高，平均占比55%（范围2.4%–94%），这与DLBCL主要由B细胞构成的特性一致。CD4+ T细胞和CD8+ T细胞也具有显著的表达比例，分别平均占14%和9.9%。此外，M2样TAM的平均占比为7.9%，而M1样TAM则占5.4%。调节性T细胞（Treg）的平均占比为3.6%。其他免疫细胞和非免疫细胞的占比则相对较低，分别为0.26%和4.0%。值得注意的是，PD-1+ T细胞和PD-L1+ B细胞的表达具有高度特异性，PD-L1在M2样TAM中表达比例最高，达到36.5%，而在B细胞中PD-L1的表达比例较低，为4.01%。

研究还发现，细胞组成在不同样本之间存在显著差异。然而，所有RCN至少在39%的样本中出现，这表明这些区域具有一定的普遍性。其中，PD-1+细胞丰富的RCN4仅出现在少数样本中，这提示了其在DLBCL中的特殊性。

### 免疫细胞的相互作用

研究团队进一步分析了不同免疫细胞之间的相互作用。他们发现，许多免疫细胞倾向于与相同表型的细胞相互作用，这表明免疫细胞往往聚集在一起。相比之下，B细胞则表现出对不同T细胞和PD-L1+ M2样TAM的排斥行为。这一发现可能揭示了TME中免疫细胞之间的动态关系，以及这些关系如何影响淋巴瘤的免疫逃逸机制。

此外，研究还发现，B细胞与PD-1+ T细胞之间的相互作用模式与患者的临床特征和预后存在关联。具体而言，当B细胞远离PD-1+ T细胞时，患者往往表现出更温和的疾病进展和更好的生存率。这种模式的临床意义得到了验证，研究团队通过Kaplan-Meier生存分析发现，这些患者的5年无进展生存率（PFS）和总体生存率（OS）显著提高。

### 空间组织的临床意义

在研究中，团队识别了10种RCN，并发现它们的组织方式对患者的预后具有重要影响。例如，CD8+ T细胞丰富的RCN2与免疫贫乏的RCN5之间的距离较近时，患者的生存率更高。相反，当PD-L1+ B细胞丰富的RCN7与CD8+ T细胞丰富的RCN2之间距离较近时，患者的生存率则显著下降。这种空间组织模式不仅影响了患者的预后，还可能影响治疗策略的选择。

### 与淋巴瘤亚型和基因亚型的关联

研究团队还探索了RCN与DLBCL亚型和基因亚型之间的关系。他们发现，GCB样DLBCL中M1样TAM丰富的RCN8占比更高，而ABC样DLBCL中PD-L1+ M2样TAM丰富的RCN10占比更高。此外，某些RCN与特定的驱动突变（如GNA13和PRDM1）相关。例如，GNA13突变与高比例的B细胞/免疫细胞丰富的RCN1相关，而PRDM1突变则与缺乏M1样TAM丰富的RCN8相关。这些发现表明，RCN不仅与TME的免疫组成相关，还可能与肿瘤的基因组特征和微环境特征相互作用，从而影响患者的预后。

### 潜在的治疗意义

研究结果对DLBCL的免疫治疗策略具有重要意义。尽管PD-1和PD-L1靶向免疫治疗在DLBCL中的效果有限，但研究发现，T细胞与B细胞之间的相互作用可能影响PD-1表达的临床意义。这提示了PD-1阻断疗法可能在某些特定的TME结构中具有潜在的疗效，特别是在T细胞活性被B细胞抑制的患者中。此外，RCN的空间组织可能为选择合适的免疫治疗患者提供依据，例如，CD8+ T细胞丰富的RCN与免疫贫乏的RCN之间的接近性可能意味着更佳的治疗反应。

### 未来的研究方向

尽管本研究提供了丰富的空间信息，但仍然存在一些局限性。例如，研究团队使用了12种标记物的抗体面板，虽然覆盖了主要的免疫细胞类型，但可能遗漏了一些重要的细胞表型。此外，研究样本数量虽然较大，但某些RCN的频率较低，可能影响其临床相关性的验证。因此，未来的研究需要更详细的细胞表型分析和更高通量的抗体面板，以进一步揭示TME的复杂性。

### 结论

综上所述，本研究通过分析DLBCL的TME，揭示了其细胞组成和空间组织的多样性，并指出这些特征与患者的预后密切相关。特别是，某些RCN的组织方式可能为免疫治疗策略的选择提供依据。这一发现不仅加深了我们对DLBCL生物学特性的理解，还为未来开发更有效的免疫治疗方案提供了理论支持。