利用腹膜液mRNA谱分析探索胰腺癌腹膜转移的分子特征与预后价值

本研究针对胰腺癌腹膜转移（PM-PC）患者预后评估手段匮乏的临床难题，利用福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）腹膜液沉淀进行多重mRNA表达谱分析，鉴定出56个上调mRNA和130个下调mRNA，发现ESRP2、EPCAM等6个mRNA的高表达与短期生存显著相关，为PM-PC的分子分型和预后预测提供了新策略。

　　

胰腺癌腹膜转移（Peritoneal Metastasis from Pancreatic Cancer, PM-PC）是一种极具侵袭性的癌症并发症，患者预后极差，中位生存期仅7-8个月。目前，临床缺乏有效的预后分层工具，传统细胞学检查在评估治疗反应和预后方面作用有限。腹膜液（Peritoneal Fluid, PF）作为腹腔微环境的“液体活检”样本，蕴含着丰富的生物学信息，可能为理解PM-PC的分子机制和开发新的预后标志物提供独特视角。

在这项发表于《Pathology - Research and Practice》的研究中，Sharuya Kulatheivam、Lea Lecanda Mariager Jakobsen、S?nke Detlefsen等研究人员探索了利用FFPE腹膜液沉淀进行多重mRNA分析的可行性，旨在识别PM-PC中的差异表达mRNA并评估其预后价值。

研究团队收集了19例PM-PC患者和16例良性腹水对照的FFPE腹膜液沉淀样本，采用nCounter Tumor Signaling 360 Panel（nanoString）对760个癌症相关mRNA进行表达谱分析。关键技术方法包括：样本来自Odense PIPAC中心的患者队列；通过离心和石蜡包埋处理腹膜液沉淀；RNA提取使用Veracyte FFPE RNA提取试剂盒；表达谱数据通过nSolver软件和R语言进行质量控制、标准化和差异表达分析；采用limma包进行统计学分析；使用基因集富集分析（GSEA）探索信号通路；通过免疫细胞化学（ICC）验证蛋白表达。

3.1. 样本鉴定与纳入

研究通过流程化筛选最终纳入19例PM-PC和16例对照样本，临床特征显示两组在年龄、性别等方面无显著差异，确保了后续分析的可比性。

3.2. 无监督聚类显示恶性与对照样本分离

主成分分析（PCA）显示无批次效应，无监督层次聚类热图明确将PM-PC样本与对照分开，仅少数样本存在重叠，表明mRNA表达谱能有效区分恶性与良性腹水。

3.3. 差异表达mRNA与预后关联分析

相比对照，PM-PC中共186个mRNA显著差异表达（56个上调，130个下调）。上调最多的包括TSPAN1、EPCAM、CEACAM1等上皮和肿瘤相关基因，而下调基因如TNFAIP3、THBS1、IL6等多与免疫和炎症反应相关。进一步分析发现，ESRP2、EPCAM、SFN、ITGB6、ESRP1和GRHL2的高表达与患者短期生存显著相关（P<0.0025）。

3.4. GSEA揭示上调通路

GSEA显示PM-PC中外泌作用、染色体分离、钙黏蛋白结合等通路显著富集，表明PM-PC细胞具有强烈的增殖、分泌和侵袭特征。

3.5. 细胞来源注释与ICC验证

上调mRNA多源自肿瘤上皮细胞（如EPCAM、CEACAM1），而下调mRNA主要来自免疫细胞（如CD68、IL6）和间皮细胞。ICC实验证实CEA、EpCAM、CK17等蛋白在PM-PC中高表达，而CD68在对照中高表达，与mRNA结果一致。

3.6. Kaplan-Meier生存分析

根据ROC确定的最佳截断值，将患者分为高表达和低表达组，KM曲线显示ESRP2、EPCAM等6个基因的高表达组生存期显著缩短。

研究表明，FFPE腹膜液沉淀适用于mRNA表达分析，能有效反映PM-PC的分子特征。鉴定出的差异表达mRNA不仅揭示了肿瘤上皮和免疫微环境的相互作用，还发现了6个与预后密切相关的基因（ESRP2、EPCAM、SFN、ITGB6、ESRP1、GRHL2）。这些基因多数在肿瘤进展中扮演重要角色，如EPCAM促进肿瘤生长，SFN和ITGB6与侵袭性相关。

该研究的优势在于利用临床常规剩余的FFPE样本，易于整合到现有病理工作流程中。然而，样本量较小和靶向Panel的局限性意味着未来需通过更大规模的研究和RNA测序技术进一步验证和扩展这些发现。总体而言，这项工作为PM-PC的预后分层提供了新的分子工具，并为理解腹膜转移的生物学机制提供了重要线索。