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胃癌（GC）死亡率高，寻找新治疗策略迫在眉睫。研究人员聚焦长链非编码 RNA（lncRNA），开展 LINC01016 对胃癌影响的研究。结果发现 LINC01016 可促胃癌侵袭转移，或为潜在治疗靶点，为胃癌治疗带来新希望。
在癌症的世界里，胃癌（GC）可谓是一个 “狠角色”。2022 年，全球有超 96.8 万新确诊的胃癌患者，约 66 万人因此失去生命，它是全球第五大常见癌症，也是第四大癌症致死原因 ，尤其在东亚地区，发病率还在不断攀升。更糟糕的是，很多患者确诊时已处于晚期，癌细胞恶性增殖、广泛侵袭、发生淋巴结转移，还对药物产生抵抗，导致死亡率居高不下。因此，深入了解胃癌的发病机制，找到新的诊断标志物和治疗策略，成为了医学领域亟待攻克的难题。
在这样的背景下，山东大学齐鲁医院和潍坊人民医院的研究人员勇挑重担，开启了一场探索之旅。他们将目光聚焦在了长链非编码 RNA（lncRNA）上。lncRNA 是一类长度超过 200 个核苷酸的非蛋白质编码 RNA 分子，别看它不能编码蛋白质，却在肿瘤的发生发展过程中起着至关重要的作用，参与染色质相互作用、转录调控等多种生物学过程 。研究人员发现，LINC01016 在胃癌组织中的表达存在异常，那么它在胃癌的发展进程中究竟扮演着怎样的角色呢？经过一系列研究，他们有了重大发现：LINC01016 的高表达与胃癌患者较差的无复发生存期（RFS）和总生存期（OS）相关，它可以促进胃癌细胞的迁移和侵袭，是一个潜在的治疗靶点和诊断标志物。这一研究成果发表在《Cell Death and Disease》上，为胃癌的治疗带来了新的曙光。
为了开展这项研究，研究人员可谓 “各显神通”，运用了多种关键技术方法。在样本方面，他们收集了 80 例原发性胃癌组织样本，包括有淋巴结转移（LNM）和无淋巴结转移的病例。接着，使用微阵列分析筛选差异表达的 lncRNA；采用荧光原位杂交（FISH）技术检测 LINC01016 的细胞定位；利用 RNA pull-down 实验和 RNA 免疫沉淀（RIP）实验确定 LINC01016 与相关蛋白的结合关系；构建肿瘤异种移植模型来观察 LINC01016 对肿瘤生长和转移的影响；还通过生物信息学分析预测转录因子结合位点等 。这些技术为研究的顺利开展提供了有力支持。
下面我们一起来看看研究的具体结果。
- LINC01016 在胃癌伴淋巴结转移中上调：研究人员通过对 5 例有 LNM 和 5 例无 LNM 的胃癌样本进行微阵列分析，发现 LINC01016 在有 LNM 的胃癌组织中表达显著更高。随后，他们又对 80 例胃癌组织样本进行分析，qRT-PCR 结果也证实了这一点，且 LINC01016 可用于区分有无 LNM 的患者。进一步研究发现，LINC01016 在胃癌细胞系中也明显上调，主要定位于细胞核，其高表达与肿瘤分化程度、侵袭深度和 LNM 相关，高表达 LINC01016 的患者 OS 和 RFS 更短 。
- SP-1 激活 LINC01016 转录并促进胃癌细胞迁移和侵袭：为了探究 LINC01016 过表达的原因，研究人员构建了多组截断质粒，确定了 LINC01016 的核心启动子区域。通过 JASPAR 算法筛选出多个潜在转录因子，经实验验证，只有 SP-1 能增强 LINC01016 的表达。ChIP 实验表明 SP-1 可与 LINC01016 启动子特异性结合，过表达 SP-1 能促进胃癌细胞迁移和侵袭，且 SP-1 可能通过上调 LINC01016 发挥作用 。
- EIF4A3 是 LINC01016 的结合伙伴：研究人员通过 RNA pull-down 实验、质谱分析和 western blot 确定 EIF4A3 是 LINC01016 的结合蛋白，RIP 实验进一步验证了二者的结合关系。通过不同 LINC01016 片段探针的 RNA pull-down 实验，发现 1217 - 1857 核苷酸区域是二者结合的核心区域 。
- EIF4A3 降低 MMP9 mRNA 和蛋白表达水平：EIF4A3 参与无义介导的 RNA 衰变（NMD）过程，研究人员通过 RNA - seq 发现 EIF4A3 过表达会使 MMP9 mRNA 水平降低，Actinomycin D Chase 实验和 western blotting 证实 EIF4A3 可降低 MMP9 mRNA 和蛋白水平 。
- LINC01016 增加 MMP9 mRNA 和蛋白表达水平：研究人员推测 LINC01016 可能通过 EIF4A3 影响 MMP9 表达，实验结果显示，沉默或过表达 LINC01016 不影响 EIF4A3 表达，但过表达 LINC01016 可显著增加 MMP9 mRNA 和蛋白表达 。
- LINC01016 与 EIF4A3 结合，削弱 EIF4A3 介导的 MMP9 的 NMD 效应：研究发现 EIF4A3 可与 MMP9 mRNA 结合，通过 NMD 机制降低其表达。当 LINC01016 过表达时，会与 EIF4A3 结合，阻碍 EIF4A3 与 MMP9 mRNA 结合，抑制 NMD，从而增加 MMP9 表达，促进肿瘤进展 。
- EIF4A3 可潜在削弱 LINC01016 的促肿瘤作用：实验表明，过表达 EIF4A3 会抑制胃癌细胞迁移和侵袭，敲低则有相反作用。共转染实验显示，EIF4A3 可减弱 LINC01016 诱导的细胞迁移和侵袭活性 。
- LINC01016 可能是胃癌的潜在治疗靶点：通过构建肿瘤异种移植模型，研究人员发现敲低 LINC01016 可抑制肿瘤的侵袭和转移，且敲低 LINC01016 后，肿瘤组织中 MMP9 的 mRNA 和蛋白表达水平显著降低。这表明 LINC01016 或 LINC01016 介导的 EIF4A3/MMP9 可能是胃癌治疗的可行靶点 。
综合研究结果和讨论部分，这项研究意义非凡。它首次揭示了 LINC01016 在胃癌中的上游调控机制，发现了 SP-1 对其转录的激活作用。同时，明确了 LINC01016 通过与 EIF4A3 结合，影响 MMP9 表达，进而调控胃癌细胞迁移和侵袭的分子机制。这不仅加深了我们对胃癌发病机制的理解，更为胃癌的诊断和治疗提供了新的潜在靶点，有望为胃癌患者带来新的治疗方案，改善他们的预后，在胃癌研究领域迈出了重要的一步。
