重大发现：MLPH - 原发性纤毛 - PLCG1 轴如何驱动胰腺癌转移

胰腺癌（PDAC）转移机制不明，研究人员开展 “Melanophilin（MLPH）诱导原发性纤毛促进胰腺癌转移” 的研究。发现 Gln 缺乏时 MLPH 上调，经原发性纤毛 - PLCG1 轴促 PDAC 转移。这为理解 PDAC 转移机制和治疗提供新思路。

　　胰腺癌，这个隐匿在人体深处的 “杀手”，一直是医学领域难以攻克的难题。它是全球癌症相关死亡的重要原因之一，其中胰腺导管腺癌（PDAC）最为常见且恶性程度极高。PDAC 患者的 5 年生存率仅约 9%，晚期诊断、化疗耐药以及癌细胞的转移，成为了阻碍患者生存的重重 “关卡”。尤其是癌细胞的转移机制，就像隐藏在迷雾中的神秘宝藏，吸引着无数科研人员去探索。在 PDAC 的微环境中，谷氨酰胺（Gln）缺乏是一个显著特征，然而它究竟如何推动癌细胞转移，这一问题始终困扰着科学界。

为了揭开这层神秘的面纱，国立成功大学医学院的研究人员踏上了探索之旅。他们聚焦于 “Melanophilin（MLPH）诱导原发性纤毛促进胰腺癌转移” 这一主题展开研究，最终在《Cell Death and Disease》上发表了重要成果。这项研究意义重大，不仅揭示了 Gln 缺乏促进 PDAC 转移的全新分子机制，更为开发针对胰腺癌转移的治疗策略提供了关键的理论依据。

研究人员采用了多种关键技术方法来开展此项研究。在细胞实验方面，运用 RNA 干扰（RNAi）技术敲低相关基因，如 MLPH、IFT88、CEP164 和 PLCG1 等，探究基因功能；利用 Transwell 侵袭和迁移实验检测细胞的迁移和侵袭能力。在动物实验中，构建了原位异种移植小鼠模型，通过体内生物发光成像系统（IVIS）追踪癌细胞转移情况。同时，借助 RNA 测序分析基因表达变化，运用免疫荧光染色观察细胞结构和蛋白定位，使用免疫印迹检测蛋白表达水平，还通过定量逆转录 PCR（qRT - PCR）测定 mRNA 表达量。研究使用的样本队列包括从国立成功大学医院（NCKUH）获取的 97 例术后胰腺癌标本。

研究结果

1. 谷氨酰胺剥夺促进 PDAC 的 EMT 和转移：研究人员将人 PANC - 1 细胞和小鼠 KPC 细胞分别在 Gln 缺乏的培养基中培养 3 天（短期， - Q）或 3 个月（长期， - QQ）。发现短期 Gln 剥夺抑制细胞生长，而长期 Gln 缺乏时细胞可恢复增殖能力，且 GLUL 表达上调。 - QQ 细胞的迁移和侵袭能力增强，EMT 相关转录因子（如 ZEB2、SNAI2、TWIST1）mRNA 水平上升，上皮标记物（ZO - 1、E - cadherin）下调，间质标记物（N - cadherin、vimentin）上调，MMP2 表达和活性也增加，这些表明 Gln 缺乏促进了 PDAC 细胞的 EMT 和侵袭。
2. MLPH 上调促进 Gln 缺乏条件下 PDAC 的转移：通过 Bulk RNA 序列分析发现，MLPH 在 - QQ PANC - 1 细胞中显著上调。临床数据分析显示，MLPH 在 PDAC 肿瘤组织中表达高于正常胰腺组织，且高表达与患者预后不良、无病生存期（DFS）和总生存期（OS）缩短相关。敲低 MLPH 可抑制 Gln 缺乏诱导的细胞迁移和侵袭，在 3D 肿瘤球模型和体内原位异种移植小鼠模型中均证实 MLPH 能促进 PDAC 转移。
3. 原发性纤毛促进 Gln 缺乏时 PDAC 的 EMT 和转移：免疫荧光染色显示 - QQ PANC - 1 和 - QQ KPC 细胞中存在原发性纤毛，Gln 补充可抑制其生成。敲低纤毛相关基因 IFT88 或 CEP164，可抑制原发性纤毛生成，并减轻 Gln 缺乏诱导的 EMT、迁移和侵袭。在 3D 肿瘤球培养中，也证实原发性纤毛能促进 PDAC 细胞侵袭，且原发性纤毛还可保护 PDAC 细胞免受吉西他滨的杀伤。
4. MLPH 促进 Gln 缺乏时原发性纤毛的形成：分析临床数据发现 MLPH 与纤毛相关基因 IFT43 呈正相关。敲低 MLPH 可抑制原发性纤毛形成，过表达则促进其形成。MLPH 定位于细胞质、原发性纤毛基部和中心体，且在细胞周期的 G0/G1 期和中期表达较高，表明 Gln 缺乏通过上调 MLPH 促进原发性纤毛形成。
5. 原发性纤毛上调磷脂酶 Cγ1（PLCG1）促进 PDAC 转移：利用人类磷酸激酶阵列发现，Gln 缺乏时 - QQ 细胞中 PLCG1 在酪氨酸 783（Y783）的磷酸化水平显著增加，其 mRNA 和蛋白表达也上调。敲低 PLCG1 可抑制细胞迁移和侵袭，且原发性纤毛可促进 PLCG1 表达，PLCG1 定位于原发性纤毛并通过正反馈调节维持原发性纤毛生成，表明 Gln 缺乏诱导的原发性纤毛通过促进 PLCG1 表达和定位，促进 PDAC 转移。

研究结论与讨论

研究表明，Gln 缺乏通过上调 MLPH，招募其至中心体促进原发性纤毛生成，原发性纤毛进一步诱导和激活 PLCG1，从而促进 PDAC 的 EMT、侵袭和转移，PLCG1 还通过正反馈维持原发性纤毛生成。这一发现揭示了 Gln 缺乏促进 PDAC 转移的新机制，也为胰腺癌的治疗提供了潜在的靶点。

然而，研究也存在一些待解决的问题。虽然发现了 MLPH 在 Gln 缺乏条件下促进 PDAC 转移的作用，但 Gln 缺乏诱导 MLPH 上调的机制尚未明确，推测可能与糖皮质激素受体（GR）有关，需进一步研究证实。此外，MLPH 促进原发性纤毛生成的分子机制也有待深入探索。针对 PLCG1 促进 PDAC 转移的具体分子机制，如 PKCi 和 CRAC 通道的作用，也需要更多研究来阐明。这些问题的解决将为胰腺癌的治疗开辟新的道路，有望为患者带来新的希望。