Western Blot使用Odyssey近红外荧光检测，高分文章不用愁

你是否还在为 Western Blot 实验的重复性问题感到困扰？是否在追求完美条带的过程中一再重复实验却始终无法如愿？在研究蛋白质翻译后修饰时，你是否还在使用传统的平行试验方法？如果你渴望获得精准且完美的条带，Li-Cor Odyssey 将为你提供解决方案。

上图完美的Western Blot条带出于Nature Chemical Biology 上的文章：“Recruitment of FBXO22 for targeted degradation of NSD2”。本篇文章作者描述了一种靶向蛋白质降解（TPD）策略，涉及招募FBXO22诱导组蛋白甲基转移酶和致癌基因NSD2的降解。在携带NSD2功能获得性突变p.E1099K的急性淋巴细胞白血病细胞中，UNC8732促进FBXO 22介导的NSD2降解，导致生长抑制、细胞凋亡和耐药性逆转。在文中RCH-ACV，U2OS, MCF7和293 T-REx细胞裂解物免疫印迹均是使用近红外激光成像系统Li-Cor Odyssey CLx完成。

Odyssey CLx

部分结果展示

1 UNC8732靶向急性淋巴细胞白血病细胞NSD2突变体

UNC8732能够降解NSD2突变的急性淋巴细胞白血病细胞(ALL)中的NSD2。在NSD2 p.E1099K突变细胞中，相对于NSD2 WT细胞显示高水平的H3K36me2和低水平的转录抑制H3K27me3，这种表观遗传模式在NSD2降解后得以逆转。除了诱导细胞凋亡和降低细胞活力外，UNC8732还能够有效克服NSD2 p.E1099K突变ALL细胞对糖皮质激素（GC）治疗的耐药性，这一特性在复发性ALL的临床治疗中具有重要意义。

2 醛代谢物驱动NSD2降解

基于液相色谱-质谱(LC-MS)的代谢物鉴定研究一代降解剂UNC8153和第二代降解剂UNC8732均发现发现了一种代谢物，与伯胺转化为醛相对应，并且发现FBS中的胺氧化酶负责这种转化。作者合成并分离了水解不稳定的醛的前药UNC9801和UNC10088，发现UNC10088与UNC8732不同，它不依赖于FBS的存在来促进NSD2的降解(图2j)，相应的UNC8153的酸类似物，它没有促进NSD2的降解，排除了醛进一步氧化在观察到的降解中起作用的可能性。这些结果证实了含胺的NSD2降解物作为前药起作用，需要代谢成相应的醛才能发挥活性。

3 UNC8732募集SCFFBXO22泛素连接酶复合物

之前已经证明，UNC8153和UNC8732以蛋白酶体和泛素化依赖的方式起作用。利用生物素标记识别技术(BioID)和质谱联用(MS/MS)在蛋白质组范围内寻找参与降解NSD2的候选泛素E3连接酶，发现FBXO22、PSMB1、PSMB5和PSMA5均有所增加。后续使用NanoBRET蛋白-蛋白相互作用实验，证明UNC8732介导的FBXO22向NSD2的募集。

总结

近红外激光成像系统Li-Cor Odyssey DLx是Odyssey CLx的更新版，其采用的是近红外荧光成像。传统的化学发光是基于辣根过氧化物酶的原理，会受到底物浓度、温度、时间的影响，因此使用化学发光成像时，成像时间很重要，而近红外荧光成像的信号是稳定的，相比于化学发光定量更准确。Li-Cor Odyssey DLx拥有双激光器双检测器，特别是针对蛋白翻译后修饰研究时，可同一张膜同时成像多个蛋白，减少了平行胶和抗体剥离再孵育带来的操作误差，使Western Blot数据的定量更准确，重复性更高。如文中H3K36me2和H3K36me3的甲基化水平研究，更能发现细小差异。

Li-Cor Odyssey DLx和CLx还拥有更宽的动态范围达6个数量级，能保证仪器检测到低信号时强信号不过曝，更适合药物浓度跨度较大的高通量研究。如文中使用的In-Cell Western (ICW)测定的半数最大降解浓度(DC50)值和最大降解水平（Dmax）。

Odyssey®的丰富应用

LI-COR Biosciences公司的Odyssey® 红外激光成像系统可以实现定量Western Blot检测，具有重复性好、定量准确、 多色荧光成像、背景低、灵敏度高、可直接检测、应用范围广等多种优势，其不仅可以进行孔板的In-Cell WesternTM检测，还可以实现近红外荧光Western Blot、可见荧光Western Blot 、组织切片成像、On-Cell Western、EMSA/凝胶迁移实验、荧光蛋白质芯片、荧光核酸芯片、考染胶成像、器官成像等多种应用。

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