蛋白翻译后修饰成像不用再Stripping和Re-probing啦

简介

今天分享一篇发表在JACS上的文章，题目为“Discovery of a Potent and Selective Targeted NSD2 Degrader for the Reduction of H3K36me2”。在本文中，作者开发了一种新的NSD2靶向降解物UNC8153，可以有效和选择性地降低NSD2蛋白和H3K36me2染色质标记的细胞水平，从而在一定程度上实现多发性骨髓瘤细胞病理表型的下调。

部分结果展示

01 NSD2靶向降解剂的设计与评价

作者根据已知的NSD2拮抗剂UNC6934和NSD2结构特性合成设计了一系列选择性的NSD2靶向降解物。结果显示含有精氨酸的化合物在24小时内至少部分降低了NSD2的水平，其中六碳Linker的UNC7753是NSD2最有效的降解剂，其最大观察降解值(Dmax)为81%，半最大降解浓度(DC50)为1.20±0.3μM。传统的Western Blot也进一步确认UNC7753能够以剂量依赖的方式降解NSD2的两种亚型。

文中使用LI-COR Odyssey CLx及细胞内蛋白质免疫印迹（ICW）技术检测多种合成化学物的最大降解值 （Dmax）和半数最大降解浓度（DC50）及NSD2的表达水平，以及传统Western Blot定量NSD2的蛋白表达情况。极大的提高了数据的准确性。

02 UNC7753转化为UNC8153通过UBR非依赖性机制促进NSD2降解

完全缺乏氨基酸部分的UNC8153的DC50为0.35μM，Dmax为79%，是UNC7753的三倍多。表明结果并不如之前预期的那样NSD2的降解需要一个N-末端α-氨基来识别UBR-box结构域并由UBR E3泛素连接酶介导。随后发现用UNC7753处理 U2OS 细胞，并通过质谱法发现细胞裂解物中存在高浓度的UNC8153。结果表明类似含有氨基酸的UNC7753可能是NSD2降解物一种前体药物。

03 UNC8153降低多种细胞系中的H3K36me2水平。

作者将UNC8587作为阴性对照化合物，并在 KMS11 细胞（图BC）、 MM1S 细胞（图E）、RS411 细胞（图F）和U2OS 细胞（图G）中检测了UNC8587对NSD2 降解和 H3K36me2 水平的影响。

总结

文中多次使用LI-COR Odyssey CLx进行检测细胞内蛋白质免疫印迹（ICW）和Western Blot实验。LI-COR Odyssey CLx是一款高通量、双重荧光扫描仪，特别适用于ICW和Western Blot实验。它通过使用近红外荧光标记，提供更高的灵敏度和更低的背景噪声，从而提高了数据的准确性和通量。它的优势包括同时检测多个标记、定量分析的精确度以及快速的数据采集，显著提高了实验效率和数据可靠性。

Odyssey®的丰富应用

LI-COR Biosciences公司的Odyssey® 红外激光成像系统可以实现定量Western Blot检测，具有重复性好、定量准确、 多色荧光成像、背景低、灵敏度高、可直接检测、应用范围广等多种优势，其不仅可以进行孔板的In-Cell WesternTM检测，还可以实现近红外荧光Western Blot、可见荧光Western Blot 、组织切片成像、On-Cell Western、EMSA/凝胶迁移实验、荧光蛋白质芯片、荧光核酸芯片、考染胶成像、器官成像等多种应用。

快来联系技术人员一对一咨询吧

LI-COR Biosciences公司在近红外荧光成像领域已有25年的积淀。25年来，Odyssey® 近红外激光成像系统由于可实现Western Blot精确定量，多重Western Blot检测，且重复性更高，通量更高，丰富的应用范围，因而得到了全球生物医学研究人员的信赖。

关于基因

基因有限公司成立于1992年，是一家提供生命科学科研仪器、试剂耗材和技术服务的综合服务商。基于“Gene Brightens Every Life • BioTech Connects the World”——“基因燃亮生命 • 生物技术连接世界”的愿景，专注于生命科学领域前沿技术的引进和推广，致力于推动该领域国内科研机构硬件水平及实验方案的革新与升级。同时，公司也一直致力于自主品牌的科研设备的研发与生产，拥有一系列通用性强、互补性高的自主品牌产品。

基因的服务网络遍及全国各地十多个大中城市，拥有包括仪器销售，试剂销售，市场与技术支持，维修，客服，物流等多个部门组成的完整服务体系。

我们希望通过不懈努力，为您的成功铺路搭桥，也为中国的生命科学事业赶超世界先进水平尽一己之力。欲了解更多信息，请访问www.genecompany.cn。