【无需离心+超螺旋比例更高】无内毒素质粒提取也能这么卷？

细胞转染技术在生命科学研究中具有广泛的应用，例如基因治疗、基因表达研究和药物开发等。

通过转染，可以实现基因编辑、蛋白质表达、信号传导研究等，为揭示细胞机制、开发新药和治疗疾病提供了重要工具。

质粒纯化是基因治疗上游研发过程中的重要环节。然而质粒提取过程中常会伴有内毒素的出现，内毒素水平会直接影响后续的细胞转染。

内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和蛋白复合物，当细菌裂解时会大量释放出来。

内毒素单位为EU。 质粒中内毒素含量的高低常用EU/µg表示。按照EU/µg大小，质粒被分为三个级别：

• 测序级别（>50EU/µg）

• 转染级别(<50EU/µg)

• 无内毒素级别(<0.1EU/µg)

由于内毒素两亲性和负电荷性，性质和DNA类似，因此在质粒纯化过程中会伴随质粒一同被纯化出来。

内毒素的存在会极大程度的影响转染效率，同时还可能激活免疫细胞的非特异反应，造成假阳性。因此，为了保证高转染率和转染细胞高存活率，必须从质粒制备的过程中将内毒素去除。

好物推荐！

NucleoBond® Xtra Midi/Maxi EF

来自有着近百年滤纸技术和近60年色谱技术的德国MN（MACHEREY-NAGEL），采用二代阴离子交换树脂技术和裂解液澄清方式相结合，质粒质量更高！

重力过滤和过柱，无需离心，减少离心力对质粒超螺旋结构的影响！

（NucleoBond® Xtra Midi EF Column）

推荐理由1：

内毒素低于0.1EU/ug DNA

NucleoBond® Endotoxin Free Plasmid DNA kit系列设计有专门的Endo-EF内毒素去除试剂，有效去除内毒素，避免了长时间的氯化铯超速离心步骤，无需冰上孵育30min，内毒素含量更低。

推荐理由2：

超螺旋结构保护好

滤纸和色谱技术相结合诞生的NucleoBond® Xtra Column实现裂解液重力过滤和过柱，无需离心，减少了离心力对质粒超螺旋结构的影响。

（裂解后的质粒状态（泳道1）和洗脱下来的质粒状态（泳道4）保持一致。）

推荐理由3：

抽提速度更快

NucleoBond® Xtra Column实现过滤以及质粒结合树脂合二为一，避免较长时间的离心。

NucleoBond® Finalizer仅需要5min即可以完成之前长达1h的异丙醇质粒离心沉淀操作。

 （NucleoBond® Finalizer）

操作步骤初体验

NucleoBond® Xtra Midi/Maxi EF

对内毒素敏感型真核细胞的高效转染实例！

Huh-7细胞使用某竞品转染试剂进行转染。NucleoBond® Xtra Midi EF抽取的质粒转染后的细胞活力和对照组（treatment w/o DNA)转染后的细胞活力相同。

因此，NucleoBond® Xtra Midi EF kit试剂盒提取的质粒不影响细胞活力。相反，普通分子级质粒抽提试剂盒提取的质粒可以引起细胞活力的降低。

产品信息

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