「病毒载体」如何实现高效转染？

病毒载体是指利用基因工程技术对病毒进行改造，成为外源基因运送的载体，通过感染细胞将外源基因带入细胞，从而实现长期的基因表达。

病毒载体具有感染哺乳动物细胞能力强，可插入外源基因片段长等优点，在基因工程领域已得到广泛应用。

随着细胞基因治疗和病毒生物学的发展，病毒载体已越来越成为向各种实验系统（如细胞系、原代细胞、组织脏器等）转运核酸的重要工具。

目前主流的病毒载体系统主要包括慢病毒（LV）、腺病毒（ADV）和腺相关病毒（AAV）。 

病毒载体的生产是细胞和基因治疗产品生产过程中一个重要的环节，稳健的瞬时转染是保证高产量和可靠的病毒载体大规模商业化生产的关键。

Polyplus®提供GMP级转染试剂，可用于临床病毒载体的生产。

Polyplus®是一家面向基因和细胞治疗市场的GMP级转染试剂供应商，提供一系列基于PEI的高品质转染试剂。其开发的用于基因治疗和细胞治疗领域的病毒载体生产试剂PEIpro®和FectoVIR®-AAV已经越来越广泛的应用到了众多的临床试验中，并成为了行业的金标准。其中PEIpro®-GMP是市面上第一款完全GMP级转染试剂。

1. PEIpro® 系列产品

PEI的生产遵循非常严格的质量控制和法律法规，有三个质量等级：

（1）研发级的PEIpro®用于工艺开发。

（2）更好质量等级的PEIpro®-HQ用于临床前研究和早期临床试验。

（3）最高质量等级即完全GMP级别的PEIpro®-GMP可用于临床病毒载体的生产（包括慢病毒，腺病毒，腺相关病毒等），满足细胞治疗和基因治疗的质量和监管要求。

2. 专为悬浮体系生产AAV开发的

FectoVIR®-AAV

FectoVIR®-AAV 是新一代转染试剂，专为在悬浮和贴壁 HEK-293 衍生细胞体系中大规模生产rAAV而开发。FectoVIR®-AAV转染试剂保证更高的 rAAV 滴度，提高大规模生产的可放大性，拥有药品GMP级产品降低生产工艺的风险。FectoVIR®-AAV GMP级产品在经过验证的无菌工艺下生产，符合 ICH Q7、GMP指南第二部分。

（1）与PEIpro®和其他竞争对手相比，FectoVIR®-AAV 在悬浮细胞中能生产更高滴度的rAAV病毒载体。与其他竞争对手相比，FectoVIR®-AAV可重复性地大幅提高AAV产量，可高达10 倍。

和竞品相比，FectoVIR®-AAV 可提高rAAV-2-GFP的滴度达10倍。按厂家推荐条件进行转染，72小时后收取病毒。

（2）大规模瞬时转染需要在给定的时间范围内将大量转染复合物添加到悬浮细胞中。FectoVIR®-AAV 经过优化，可将复合物体积降低至1%，转染复合物的稳定性提高到3小时，易于转染复合物的转移和工艺放大。

使用FectoVIR®-AAV制备不同体积的转染复合物：最终培养体积的10%，5%和1%。转染后72小时使用qPCR定量检测。

按厂家推荐条件进行转染，使用不同的复合物孵育时间（15分钟到3小时）。转染后72小时使用qPCR定量检测。

3. FectoVIR®-LV

慢病毒载体被认为是同种异体或自体细胞疗法（如CAR-T）的首选载体。细胞治疗生产商通常使用瞬时转染系统生产这些载体，在工艺开发阶段进行放大。FectoVIR®-LV是下一代转染试剂，不含动物源成分，专为在HEK-293系统中提高LV的产率而设计。使用FectoVIR®-LV可以增加每批次生产的剂量数，以治疗更多的患者，同时降低生产成本。

与其他市售用于慢病毒生产的转染试剂相比，FectoVIR®-LV可提高功能滴度达3倍。

与慢病毒生产领域的竞争者相比，FectoVIR®-LV表现出高产率。

FectoVIR®-LV在提高生产率的同时DNA用量可以减半。Polyplus提供了全面的DOE服务，以优化转染步骤的关键参数，达到更高的滴度。

FectoVIR®-LV转染方案使用更少量的DNA并优化滴度，以提高工艺经济性。

大规模瞬时转染的挑战包括在最佳时间范围内转移转染混合物。如果转染试剂不适合大规模生产，这一步骤可能成为一个限制。FectoVIR®-LV为大规模生产而设计，可减少复合物体积并提高复合物稳定性， 从而有足够的时间将混合物转移到大型生物反应器（>200 L）中。使用推荐的5%复合物体积和30分钟的复合物孵育时间，FectoVIR®-LV证明了其高效性，该条件可以进一步优化以符合您的工艺。Polyplus建议使用适合您系统的DOE研究。

基因有限公司作为Polyplus全国一级代理商，为您提供适合用于病毒生产、蛋白/单抗生产、非病毒载体的体内转染及生命科学研究（各种核酸转染）四大产品线相关转染试剂。欢迎扫码添加产品专员了解更多产品信息！