NEB推出新款试剂盒，实现单碱基分辨率的5hmC检测

新款试剂盒能够准确灵敏地区分5hmC与C和5mC，推动表观遗传学研究

New England Biolabs（NEB）公司近日宣布推出NEBNext Enzymatic 5hmC-seq Kit（E5hmC-seq™），它采用新的酶促方法来特异性检测5hmC位点。这种温和的酶促方法可以带来高质量的数据，而DNA起始量为100 pg至200 ng。

5-甲基胞嘧啶（5mC）是一种重要的DNA甲基化修饰，广泛存在于动植物基因组中，被称为“第五种碱基”。尽管5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）修饰的生物学意义不如5mC那么明确，但5hmC在不同组织间的丰度存在显著差异，这表明它也许在基因调控及其他生物过程中发挥关键作用。

NEBNext产品组合管理部副主任Fiona Stewart表示：“到目前为止，由于缺乏精确的检测方法，5hmC的研究一直受到阻碍。尽管我们的NEBNext Enzymatic methylseq（EM-seq™）是甲基化检测的金标准，可以检测5mC和5hmC，但不能区分它们。此外，亚硫酸氢盐处理会造成样本片段化和DNA损伤，并降低数据质量，从而限制了其实际应用。”

为了应对这些挑战，NEB开发出NEBNext Enzymatic 5hmC-seq Kit，它采用两步酶促转化流程对5hmC位点进行特异性检测。据Stewart介绍，酶促法能够最大限度地减少DNA损伤，并在Illumina测序后将5hmC与未修饰的胞嘧啶（C）和5mC区分开来。此外，用户可以从EM-seq数据中扣除E5hmC-seq数据，从而精确测定单个5mC和5hmC位点。

这款试剂盒包括E5hmC-seq转化和文库制备所需的试剂，与Illumina测序兼容。另外，还提供一个转化模块，用于文库制备以外的应用。