NanoDrop智能污染物分析确保您得出高保真度的RT-qPCR结果

【字体: 时间:2024年10月17日 来源:基因有限公司

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  通过NanoDrop Acclaro™智能污染物分析技术预先确定污染物并报告准确的校正浓度时,可以有效节省时间、节约资源,避免实验失败。

在进行RT-qPCR(实时荧光定量PCR)实验时,确保核酸样本的浓度和纯度是实验成功的关键。蛋白质、苯酚、胍盐等污染物的残留会严重影响实验的准确性,导致Cq值(循环阈值)偏高,甚至产生假阴性结果。MIQE(Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments)指南明确指出,对RNA样本进行质控是确保RT-qPCR结果一致性的重要步骤。

因苯酚吸收光谱跟核酸相同,传统的A260/A280纯度方法无法有效识别核酸中的苯酚污染,可能导致DNA聚合酶或者逆转录酶失活导致假阴性结果,或者以错误的模板量加入qPCR体系导致Cq值虚高。NanoDrop智能污染物分析技术,可以敏感地识别核酸样本中的蛋白、苯酚、胍盐等的污染,并校正给出真实核酸浓度,保障得出高保真度的qPCR结果。

为了验证蛋白质、苯酚等对RT-qPCR结果的影响,Thermo团队向RNA标准品中混入苯酚、TRIzol、BSA 和血红蛋白后,使用 NanoDrop One/One C 分光光度计上的 RNA 应用测量样品。使用NanoDrop Acclaro™智能污染物分析技术提供了原始和校正后的 RNA 浓度。分别使用校正后的浓度和原始浓度将样品稀释至 25 ng/µL 目标浓度,然后上样到 PCR 板上进行RT-qPCR实验。

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通过比较对照组(未污染的样品)、掺杂了污染物的样品(Acclaro™校正前后)发现,对照组的Cq值为24,而掺杂TRIzol的样品在未校正前Cq值上升至25.3,但经过校正后,其Cq值又降低至23.8,接近对照组的水平;同样地,掺杂苯酚校正前后的Cq值分别为28.5和26.6;掺杂BSA校正前后的Cq值分别为31.4和27.4;掺杂血红蛋白校正前后的Cq值分别为28.8和27.9。但是污染物消光系数过高(如血红蛋白)将不能触发Acclaro™校正功能,无法对下游实验进行有效修正。结果显示,苯酚、TRIzol和蛋白质等污染物的存在会导致Cq值虚高,但经NanoDrop Acclaro™智能污染物分析校正后可以使用真实的模板浓度构建qPCR体系,使其更接近原始的数据(无污染物存在时的Cq值),从而获得高保真度的RT-qPCR结果。

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因此,通过NanoDrop Acclaro™智能污染物分析技术预先确定污染物并报告准确的校正浓度时,可以有效节省时间、节约资源,避免实验失败。它能够在实验早期阶段就发现问题,给实验者提供有关污染物的详细信息,有助于后续的实验优化和结果分析,从而节省了重新实验所需的时间和资源,避免了实验失败,确保了科研工作的顺利进行。

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NanoDrop的优势

☑ 1-2μL的测量体积

☑ 8s内给出检测数据

☑ Acclaro™智能污染物分析技术

☑ 更宽的光谱范围,更高的检测上限

☑ 自动监测液柱的功能

写在最后

RT-qPCR实验前的核酸质控是确保实验成功的关键步骤。传统的A260/A280纯度方法无法有效识别核酸中的污染物(如苯酚),污染物会导致RNA浓度被高估和Cq值降低。NanoDrop One/OneC的Acclaro™智能污染物分析技术能检测污染物并报告校正后的核酸浓度,有助于实验前优化方案,从而提高实验的准确性和可靠性。

基因有限公司自2004年成为Thermo Fisher公司在中国区的合作伙伴,至今有近20年的合作历史,负责NanoDrop全系列产品线的售前咨询、售后安装、应用培训和维修维护等服务。目前在中国有数万台装机,服务了几十万用户。

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关于基因

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