干货分享丨化繁为简，如何让PCR更省时高效？

　　

当你准备对大量的样品进行DNA筛选时，在重复提取DNA过程中是否感觉耗时费力？

     你有没有想过直接用原始样本材料进行PCR扩增，做提前的DNA筛查呢?

     你有没有想过可以节省掉一些不必要的核酸提取的繁复步骤?

     我们想到了，并且在基因分型、转基因、质粒检测、基因敲除分析、DNA来源鉴定、物种鉴定、SNP分析等领域已经广泛应用。

它就是——“直接PCR”。

一、什么是“直接PCR”

      直接PCR（Direct PCR）是一种无需经过核酸提取，可直接使用动物或植物组织等材料直接进行扩增的反应。

      优势：无需提取DNA，为DNA扩增带来前所未有的便捷，节约了大量的时间和成本。

     直接PCR与常规PCR的主要区别是：直接PCR中使用定制的缓冲液。该缓冲液对于参与直接PCR反应的酶的耐受性和buffer的兼容性有相对应的要求。

     尽管常见的样品中或多或少都会存在PCR抑制剂，但在酶和buffer的作用下直接PCR仍可实现可靠的扩增。而传统的PCR反应需要以高质量的核酸为模板进行反应，如模板中含有蛋白以及其他杂质时就会抑制PCR反应的顺利进行。

二、MN 直接PCR扩增实验方案

直接PCR的核心就是具有高度耐受的聚合酶，可直接对样本中的核酸分子进行检测。MN研发的直接PCR系列具有优秀的耐受抑制组分，有针对不同样品如动物组织、全血等PCR产品，助力快速检测。

1.小鼠组织样本

5分钟内可完成小鼠样本室温裂解和98℃热失活，取部分裂解液作为后续PCR模板，30-90min快速完成PCR检测。Master mix 含有红色染料，因此 PCR产物可直接进行凝胶电泳。

      

      相关实验数据：

2.血液样本

可使用新型血液转移工具快速方便的将小份血液转移到PCR mix里面。部分难处理的血液样本，例如来自于兔子、小鼠、大鼠或鸡等物种的血液，通过Inhibitor Removal Pearl，实现血液分型检测。

      相关实验数据：

3.植物样本

      使用专利的植物样本取样工具Plant Transfer Tool(PTT)插入或穿刺叶片、花瓣组织即可得到实验需要的样本，然后将PTT浸入HotStart PCR Master Mix中即可。避免了繁琐的植物组织样本收集过程，如叶片圆盘打孔等。

      在样本转移过程中，PTT上面附有的特殊涂层可以让许多植物材料中存在的PCR抑制剂在相当长的一段时间内失活。

      此外，样本转移到PCR mix之后，可以在4℃到37℃环境下存放2h，然后进行PCR循环反应。

     

       相关实验数据：

三、MN 热启动PCR 预混液

以上直接PCR扩增实验方案中，都统一使用到了同一个核心组分——热启动PCR预混液（NucleoType HotStart PCR Master Mix(2x)）。

该热启动PCR预混液包含了：聚合酶，dNTPs buffer，增强剂，loading 染料 和稳定剂。

如果您的实验只需要直接PCR试剂的核心组分,可直接购买MN热启动PCR预混液。

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