酵母细胞计数怎么办？LUNA-FX7™自动细胞计数仪来帮忙~

生物通 | 新技术专栏

【字体：大中小】 时间：2023年07月05日 来源：

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　　在这里，我们展示了如何使用LUNA-FX7™自动细胞计数仪准确并可靠地检测酵母细胞的数量和活性。

背景介绍：

酵母被广泛应用于基础研究、酿造、食品生产中，在酵母的使用过程中需要对酵母进行精确的细胞计数和细胞活性检测。由于酵母细胞体积小，基因组小，形态不规则，使用血球计数板的手工计数方法操作复杂且易出错，而对于自动细胞计数仪的要求又是比较高的。

在这里，我们展示了如何使用LUNA-FX7™自动细胞计数仪准确并可靠地检测酵母细胞的数量和活性。

实验材料：

表1：所需实验试剂和材料

待测样品制备步骤：

1. 将EC1118酵母菌株接种于YPD肉汤中，30℃、200 rpm孵育过夜。

2. 用1 x PBS按1:3 ~ 1:5的比例稀释酵母。

3. 稀释后的酵母溶液分成2份，其中1份在65℃加热20分钟，直至产生“死酵母”。

4. 使用酵母稀释液II按照1:5和1:10进一步稀释酵母。

5. 活酵母和死细胞比例按照表1进行混合。

表2：不同活性的酵母样品制备

使用LUNA-FX7™进行细胞活性线性分析

为了确定酵母活力的线性关系，用活酵母和死酵母制备了各种比例样品，然后使用LUNA-FX7™细胞计数仪进行计数和活性检测。为了在明场下检测细胞活性，将制备的酵母样品与0.02%亚甲基蓝染色液等体积混合后，取10ul装入细胞计数板。在BF明场下进行细胞计数和活力检测，如图1。每个样品重复计数3次，计算平均活性，并检测与理论活性间的线性关系。结果表明线性相关系数R2=0.9964，说明实际检测数据与理论值高度一致。

图1：A使用LUNA-FX7™自动细胞计数仪明场检测的图片；B实测活性与理论活性的线性关系。

此外，用AO/PI荧光染料对5个酵母样品进行荧光染色，取10ul进行检测。选择[CELL LINES & PRIMARY CELLS， ADVANCED]模式，专为大量聚集的细胞(如酵母)提供更好的检测结果。检测结果如图2所示，实测值与理论值的线性相关系数R2=0.9979，说明采用荧光法实际检测数据与理论值高度一致。

图2：使用LUNA-FX7™自动细胞计数仪的荧光模式测定细胞活力。A荧光场图片；B实测活性与理论活性的线性关系。

使用LUNA-FX7™进行浓度线性分析

首先使用浓缩的酵母溶液经过连续稀释法制作不同浓度的酵母，然后使用LUNA-FX7™自动细胞计数仪测定线性关系。

样品用0.02%亚甲基蓝染色后，在明场模式下进行细胞计数。如图3，R2值为0.998。样品被AO/PI染色后进行分析，在荧光模式进行计数和分析，如图4，R2值为0.9753。这表示使用LUNA-FX7™进行酵母计数，从高浓度到低浓度线性相关性高，使用LUNA-FX7™进行不同浓度的酵母计数都可以获得准确的结果。