Takara慢病毒基因导入系统解决方案

病毒基因导入系统已被广泛应用于生物学众多研究领域，在被寄予厚望的细胞和基因治疗研究中，病毒基因导入平台也已经成为主要的基因导入手段。

目前常用的病毒载体包括慢病毒、逆转录病毒、腺相关病毒、腺病毒等等，这些病毒载体各有特点，使用也有所不同，需要根据目标对象（培养细胞、动物个体）、希望的基因表达方式（瞬时，稳定），结合实验目的选择合适的病毒载体。

慢病毒是目前使用较多的病毒基因导入系统，也是细胞与基因疗法研究，尤其是CAR-T治疗，所使用的主要基因导入平台。慢病毒是单链RNA病毒，一般以人免疫缺陷病毒（HIV-1）为基础开发的居多，可用于绝大多数哺乳动物细胞基因导入，包括使用逆转录病毒难以实现的造血干细胞及神经细胞等在内的非分裂细胞。使用重组慢病毒导入的目的基因也可以整合到宿主细胞的基因组中，可实现长期稳定的基因表达。

慢病毒表达载体

慢病毒表达载体是所有慢病毒基因导入系统的关键参与者。野生型慢病毒基因组约为9.7 kb（包含两个LTR）。人工构建大于此长度的基因组，将导致产生不稳定的病毒粒子和病毒滴度的明显下降。对于慢病毒表达载体来说，大部分病毒基因组已经被其他有用的序列所取代，如筛选标记或荧光蛋白质基因，但仍有足够的空间用于目的基因克隆。

由于每个慢病毒表达载体含有的有用序列不同，因此克隆转基因的可用空间也有所不同。经过优化的慢病毒表达载体，除了含有HIV-1 LTR和慢病毒包装信号（Ψ），也会包含一些特定元件（cPPT/CTS，RRE，WPRE），这些特定元件的存在有助于改善转基因表达、病毒滴度和整体慢病毒载体功能。

慢病毒包装制备

使用重组慢病毒的生物安全问题是，可能会产生致癌病毒或具有复制能力的重组慢病毒(RCL)。然而这些担忧，可以通过仔细考虑转基因插入物的性质，并确保病毒复制仅限于发生在提供这些基本功能的特定包装细胞中，而得到大大缓解。因此，重组慢病毒可以安全使用，是将外源性遗传物质单向转移到靶细胞的有用工具。重组慢病毒的包装细胞一般为HEK 293T细胞，选择易于转染并能够高水平表达病毒蛋白的HEK 293T细胞，更有利于获得高病毒滴度。

慢病毒一般实验流程

End-to-end解决方案

Takara Bio提供end-to-end慢病毒基因导入系统解决方案，一站式解决你的产品需求，让你的研究进展快人一步。

• 慢病毒表达载体

Lentiviral vector systems

表达载体骨架类型丰富，选择多样

我们为许多应用提供多种高度优化的慢病毒载体，这些慢病毒载体是所有Lenti-X基因传递系统的关键参与者，可用于大部分哺乳动物细胞类型，包括分裂和非分裂细胞，原代细胞培养物，干细胞和神经元。

• 慢病毒包装系统

Lenti-X Packaging Single Shots

第四代包装系统，高滴度，一步操作

Lenti-X Packaging Single Shots是第四代慢病毒包装系统，兼具高便捷性和高性能，可保持实验结果的一致性；使用便捷，单次反应独立包装，只需要添加慢病毒表达载体至预混试剂中即可；包装效率高，病毒滴度可高达10⁷-10⁸ IFU/ml； 可提供泛嗜性（VSV-G）、单嗜性（ecotropic）和整合酶缺陷型多种慢病毒包装系统。

• 慢病毒滴度测定

Lenti-X p24 Rapid Titer Kit

通过简便的ELISA方法快速测定滴度

• 通过简便的ELISA方法快速测定病毒滴度
• 4小时可完成病毒滴度测定

Lenti-X p24 Rapid Titer Kit适用于检测基于HIV-1慢病毒载体的上清液滴度。该试剂盒可以特异性检测p24衣壳蛋白质，通过与p24标准品制作的标准曲线相比较，就可以获得检测样品的病毒滴度。

Lenti-X GoStix Plus

结合手机APP使用，10 min定量测定滴度

• 配合使用手机APP，仅需10 min就可定量测定病毒滴度
• 确定收获病毒的理想时机，确保一致的转导效率

Lenti-X GoStix plus将慢病毒验毒棒和一款简便的手机APP相结合，通过检测慢病毒p24蛋白质可快速定量测定慢病毒滴度。先使用已知滴度的慢病毒建立IFU/GV ratio，通过样品测定的GV值（GoStix Value）计算出相应的IFU/ml值。

• 慢病毒浓缩

Lenti-X Concentrator

操作简便，全程约1 小时，浓缩倍数10-100倍

• 操作简单，无需超速离心，
• 只需要将慢病毒上清液与浓缩试剂混合孵育后离心即可
• 全程大约1小时，可在较短的时间快速完成病毒纯化
• 滴度可提高10-100倍，回收率高达90%，浓缩效果不受浓缩规模和病毒滴度的影响

• 增强慢病毒转导T细胞

RetroNectin GMP grade

增强慢病毒/逆转录病毒转导，促进增殖

• 可直接购买用于体外临床应用，
• 无需MAT，已提交DMF至FDA
• 已用于超过68种基因治疗临床试验方案

美国国立卫生研究院Steven Rosenberg博士研究组、纪念斯隆凯特琳癌症中心、日本三重大学医院在进行相关疾病临床研究过程中，都使用了RetroNectin GMP级试剂进行了T细胞转导，众多其它临床研究使用文章也已发表。

• 慢病毒纯化

Lenti-X Purification kits

更高的纯度和产量，10倍浓缩效果

Lenti-X Maxi Purification Kit可从病毒上清液中纯化出 高产量、高纯度的慢病毒。这种基于重力流的纯化系统，操作简单、快速、高效，且纯化效果优于基于注射器的纯化系统，因为后者会损伤脆弱的病毒颗粒并降低产量。整个操作过程就像纯化质粒一样简单。

• 慢病毒整合位点分析

Lenti-X Integration Site Analysis Kit

使用基因组步移技术，确定整合位点

使用Lenti-X Integration Site Analysis Kit检测重组慢病毒载体整合的确切位点。慢病毒的复制生命周期会将慢病毒RNA基因组的一个DNA拷贝整合到宿主基因组中。所选择的整合位点对转基因的表达和宿主细胞的表现型都有重要影响。Lenti-X Integration Site Analysis Kit使用基因组步移技术来识别这些整合位点，以便对其进行测序和分析。

如此一站式的解决方案，让你选择不纠结，使用更放心。

Takara Bio作为重要的生物技术企业，在病毒基因导入系统方面造诣颇深、体系完备，拥有慢病毒系统、逆转录病毒系统、腺相关病毒系统、腺病毒全套解决方案，为相关生物学基础研究提供强力支持，为寄予厚望的细胞与基因治疗研究护航加码。

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