iBlot 3 快速蛋白转印系统：更快，更高通量

iBlot 3 快速蛋白转印系统是新一代的干式蛋白转印解决方案，采用即用型耗材，在iBlot 2 的基础上进一步优化性能，提高通量和使用便捷性。Invitrogen™ iBlot™ 3 快速蛋白印迹转印设备可最大程度地提高实验效率，实现卓越的转印效果，并有助于获得一致且可重复的实验结果。

图1. iBlot 3 快速蛋白转印系统

提高实验效率

iBlot 3 系统有两个独立控制的工作舱，同时运行两个不同的程序，同时完成总共 4 块小型凝胶（ mini） 或 2 块中型凝胶（midi）的转印，实现设备的共享。系统内置多种预编程序，轻松选择，缩短方案设置时间。

图2. iBlot 3带有左右连个工作舱，每个工作舱可以同时转印最多2块mini胶或者块midi胶，两个工作舱可以运行不同的转印程序

图3. iBlot 3 设备可获得一致的结果。将连续稀释的HEK293 裂解物（在Thermo Scientific RIPA 缓冲液中裂解）加到四种Invitrogen™ Bolt™ 4至12% Bis-Tris Plus 凝胶上（ 从左至右， 单位μg）：10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078、0.039、0.020 和0.010。将Invitrogen™ iBright™预染蛋白marker 加到最后一道。使用MES-SDS 缓冲液进行凝胶电泳。使用宽范围（30-250 kDa）预编程转印方法（25 V，6 min，低冷却），使用iBlot 3 快速蛋白印迹设备和iBlot 3 转印膜组（midi, NC），转印蛋白质。用Pierce 透明牛奶封闭缓冲液封闭印迹，然后使用抗表皮生长因子受体（EGFR）、钙网蛋白和p23 牛奶溶液的一抗孵育12 小时。在TBST 中制备二抗Invitrogen™ GAR-Alexa Fluor™ Plus 800 染料、Invitrogen™ GAMAlexaFluor™ Plus 488 染料和Invitrogen™ GAChk-Alexa Fluor™ 546 染料，加入到印迹膜中孵育2 小时。以上抗体孵育流程在Bandmate 自动化蛋白印迹处理器上完成。在iBright FL1500 成像系统上完成成像。注：GAChk = 山羊抗鸡

提高转印效率

新设计具有内置可调控冷却系统，可优化高分子量和低分子量蛋白的转印效果。

图4. iBlot 3 系统具有优异的转印效率。（A）Hsp70：Ivitrogen™ NuPAGE™ 4% 至12% Bis-Tris mini 凝胶，每孔加入梯度稀释的20、15、10、5、2.5、1.25、0.625 和0.312 μg 的A431。电泳后，使用上述方法和条件转印蛋白质。使用Invitrogen ™ Bandmate ™自动化蛋白印迹处理器完成抗体孵育。使用Thermo Scientific™ Pierce™ 透明牛奶封闭缓冲液孵育印迹膜30 分钟。将Hsp70 一抗（1:1000 透明牛奶封闭液）加入印迹膜中，并在室温下孵育12 小时。去除一抗，将GAM-HRP 二抗（1:120000，TBST）加入印迹膜中，孵育2 小时。使用Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura化学发光底物进行检测。使用Invitrogen™ iBright™ FL1500 成像系统捕捉图像。绘制每条泳道中裂解物条带的局部背景校正灰度图。（B）4EBP1 ：Invitrogen™ Novex™ 16% Tricin mini 凝胶，每孔加入有10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156 和0.078 μg 的A431。电泳后，使用上述方法和条件转印蛋白质。使用Bandmate自动化蛋白印迹处理器完成抗体孵育。印迹与Pierce透明牛奶封闭缓冲液一起孵育30分钟。将4EBP1一抗（ 1:1000透明牛奶封闭液）加入印迹膜中，并在室温下孵育12 小时。去除一抗，将GAR-HRP 二抗（1:175,000，TBST）加入印迹膜中，孵育2 小时。使用SuperSignal West Dura 化学发光底物进行检测。使用iBright FL1500 成像系统捕捉图像。绘制每条泳道中裂解物的局部背景校正灰度。注：GAM= 山羊抗鼠；HRP= 辣根过氧化物酶；TBST= 含Tween™（溶液）的缓冲液；GAR= 山羊抗兔

结果一致且可重现

预组装的一次性耗材和超快速转印方法减少影响转印结果的变量，有助于确保结果的一致性和重现性。此外，具有内置冷却功能的全新坚固设计减少了热量积聚，提高了每次运行条件的一致性。