NanoDrop One/OneC助力NGS样本核酸质控

如何改善NGS样本核酸质量？

二代测序（NGS）是基于PCR和基因芯片技术，由一代测序发展而来可以平行测序的技术，具有高通量、速度快的优点，是DNA测序的重要手段之一，可以提供快速可靠的数据结果。良好的数据很大程度上取决于测序的核酸质量，制备的DNA样本质量差或效率低都有可能导致测序片段过短、背景信号过高、数据质量下降甚至错误，因此核酸的质控在NGS流程中非常重要。

NGS步骤

图1：NGS步骤

DNA样品质控不合格对NGS的影响

对于DNA测序来说，样本质控不合格最直观的呈现就是文库产量低。而低数量（浓度）、低质量样本均会影响最终文库的丰度。文库丰度越高，代表文库承载的样本原始信息越多，最终目标区域会获得更有效的测序数据覆盖。

那么如何改善NGS样本核酸质量呢？

图2：NanoDrop One/One^C 微量紫外-可见分光光度计

NanoDrop超微量分光光度计--您的核酸质控专家！

NanoDrop One/One^C，仅需要1-2μL上样量，5s内得出结果。多种质控方法可供选择，内置Acclaro™智能样品检测技术，可以分析核酸中的蛋白质、苯酚、盐酸胍、胍盐等污染，自动计算并校正给出真实的核酸浓度。可选FDA  21 CFR Part11软件，满足合规性要求。另外还支持蛋白浓度和光谱扫描等应用。

下面与小编一起看下它强大的功能吧！

Acclaro微量污染物智能分析技术

Part01. 污染物鉴定

图3：检测界面上可同时查看多个样品信息，这里Acclaro标记了第三个dsDNA样品存在污染物。

图4：样品中存在的蛋白使A260值增大（蓝色光谱），从而dsDNA 浓度比实际的大，污染物分析技术将蛋白的含量（橙色光谱）从原始数据去扣除，从而得到校正后正确的DNA浓度（绿色光谱）

污染物鉴定：使用强大的数据分析算法鉴定样本中的污染物，检测到纯度不符合要求的样本时，会自动报警提示，提供可能的污染物信息，并对样品浓度进行矫正。点击黄色三角按钮，查看污染物信息以及矫正后浓度。

Part02. 实时技术支持

图5：样本结果异常时，导向性实时技术支持提供解决方案和参考信息。

实时故障排除指南和技术支持：通过support tools提供故障排除指南，推荐解决方案。点击警报按钮查找Acclaro支持工具，当样品A260/A280比值超过可接受范围，了解可能原因和解决办法。

Part03. 液柱监测

图6：液柱完整性监测

通过内置的传感器对样品形成的液柱进行数码成像，当样品液滴在检测过程中出现坍塌，不能形成完整的液柱时，仪器会停止检测。当液柱中含有气泡时，仪器也会报警。因为气泡会导致光衍射，影响光谱图的质量， 以及浓度计算的准确性。

良好的质控确保了高质量的文库准备，NGS若未进行有效的质控，可能会导致数据差错，得出错误结论。尤其是对于一些珍贵样本或者少量样本来说，质控不过关不仅会浪费大量时间和经费，还会丢失样本。文库制备的最后一步是需要进行PCR扩增，从而富集接头连接的片段，产生足够的文库拷贝用于测序，NanoDrop One/One^C可为NGS核酸样本质控保驾护航。

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