新型条件活性免疫荧光探针的细胞内活体成像

　　

   

   

图:(a)抗原片段基q体中的双标记荧光染料与靶抗原结合后去淬，从而显示荧光信号以显示细胞内靶点。(b) p53肽浓度依赖性荧光信号强度变化。(c)与“p53”阴性的人类细胞相比，在表达p53的细胞中，Q-body与靶点结合时显示出高荧光信号。(d) HCT116 p53和SK-BR-3共聚焦显微镜图像。不表达p53的细胞，如HCT116 p53(-/-)，不显示tamra荧光，而其他细胞(包括用Hoechst染色照亮细胞核和在明亮视野下显示细胞)显示显著的荧光。    

成像技术的最新进展使可视化细胞内动力学成为可能，这为加速强奸发育的几个关键生物学原理提供了更好的理解。 荧光标记是一种用于识别细胞内蛋白质、红外动力学和功能障碍的技术。 带有荧光染料的内部和外部探针都用于此目的，尽管与内部探针相比，外部探针可以更好地观察细胞内蛋白质。 然而，红外应用受限于与细胞内成分的非特异性结合，导致靶标特异性信号低和背景噪声高。

最近，一种称为 Quenchbody (Q-body) 的荧光染料标记免疫传感器已成功用于检测溶液中或细胞表面上的抗原。 Q-body 本质上是一种能够结合特定抗原的抗体片段。

在此背景下，由日本东京工业大学（东京工业大学）的 Hiroshi Ueda 教授领导的日本和新加坡研究人员最近报道了 Q 体在活细胞中细胞内蛋白质成像的适用性。 他们的发现现在发表在《化学科学》上。

“由于 Q-body 作为一种位点特异性和抗原依赖性成像工具，我们假设它会在与靶蛋白相互作用时显示抗原依赖性可切换荧光，从而实现细胞内动态的精确可视化。我们通过合成 Q- p53 是一种肿瘤抑制生物标志物蛋白，在 DNA 修复、细胞分裂和细胞死亡中起重要作用，”Ueda 教授解释说。

团队合成了一种名为“C11_Fab Q-body”的“双”荧光染料标记的 Q-body，与表达 p53 的人类癌细胞中的常规探针相比，它表现出更好的灵敏度和靶特异性。 由于癌细胞中 p53 的表达增加，因此 y 对几种人类癌细胞系中的 Q 体进行了电穿孔以验证 ir 假说。

与即使在没有 p53 的情况下也显示出连续荧光信号的传统探针相比，Q-body 探针在表达 p53 的“固定”细胞（具有变性蛋白质以停止分解的细胞）中显示出荧光信号。 此外，Q-body 探针可以显示固定细胞样本中的野生（对照）和突变型 p53。

Furr 团队观察到，与阴性相比，具有 p53 表达的活人结肠癌细胞系中的荧光信号强度高 8 倍。 有趣的是，Q-body 长期保持稳定，显示出荧光强度随 p53 水平实验诱导的变化而变化。

流式细胞术显示在表达 p53 的细胞中具有更高的 Q-body 免疫荧光。 此外，与 ors（有或没有 Q 体）相比，se 细胞的分选、比率和​​荧光信号显着更高。

Ueda 教授说：“现有技术无法以高特异性和高灵敏度对数量较少的细胞内靶标进行精确成像。在这种情况下，我们的研究证明了 Q 体在活细胞成像中的潜力，可以更好地显示细胞内的动态变化，并且提供了一种使用 Q 体对活细胞进行细胞内抗原特异性分选的方法。”

展望未来，我们可以期待开发更多用于可视化几种或细胞内生物标志物的 Q 体，为改进的基于细胞的强奸发育和癌症研究打开大门。

文章标题

Intra Q-body: an antibody-based fluorogenic probe for intracellular proteins that allows live cell imaging and sorting