如何为您的Western成像保驾护航？

蛋白质免疫印迹
Western Blot

蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。以往我们介绍了很多关于电泳，关于抗体孵育相关的内容，今天我们来聊一聊WB的成像技术。

不同的成像方法

目前的成像方法包括：比色法，化学发光法，荧光法。比色法和化学发光通过辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(AP）的酶促反应起作用。同时，荧光方法不依赖于反应，而是依赖于可以直接可视化的荧光团偶联抗体。使用最普遍的为化学发光法，其具有灵敏度高，操作简单，线性范围广等优势。

A：比色法    B：化学发光法    C: 荧光法

化学发光法：HRP在过氧化氢的存在下，氧化底物鲁米诺（lumino）并发光，通过发光增强剂可以使发光灵敏度提高千倍以上，用X射线胶片，CCD照相机成像装置或检测化学发光的成像仪捕获。

化学发光法高品质成像的必备条件

1  灵敏度

蛋白免疫印迹实验最常见的挑战就是检测低丰度目标蛋白。这需要优化蛋白免疫印迹流程的所有上游步骤，以及选择可能具有最高灵敏度的成像系统。

为了提高仪器的灵敏度，成像仪常采用像素合并技术，如下所示：

图示为2×2的像素合并，感光芯片的原始分辨率为16（4x4）像素。启用 2x2 的 Binning 模式，相当于将4个像素作为一个像素的模式读出，以这种模式拍摄可以将4个像素点所采集的信号叠加，相机灵敏度可以提升至原始输出的4倍，但是输出的图像分辨率却为原始分辨率的四分之一。同理，采用4x4的 Binning 模式，相机灵敏度可提升至原始输出的16倍，但图像分辨率降至原始分辨率的十六分之一，因此可以通过像素合并（Binning），增加像素尺寸，提高灵敏度。

2  分辨率

成像仪的分辨能力主要取决于样品距离、透镜质量和传感器分辨能力。要获得高分辨率的图像，就需要引入失真最小的高质量镜头。高分辨率和高灵敏度（低 f值）都需要高质量的镜头高像素传感器如果配置较差的镜头，也无法捕获良好的图像。
 
3  曝光时间和背景噪音

化学发光本身信号较弱，需要更长的曝光时间, 而在曝光时间超过5-10s时，CCD芯片就会发热，没有制冷设备的芯片，这种产热出现的“白的像素点”就会遮盖图像，图像到处可见雪花。

降低CCD的噪音就能提高CCD的监测能力，噪音在制冷CCD中基本可以被深度制冷的Peltier消除。化学发光本对CCD的降噪要求很高，应该选用深度制冷CCD相机和高通透镜头相结合，才能捕捉到微弱信号，减少背景噪音，提高成像清晰度。

4 动态范围

动态范围决定着你能否同时在一张胶上面同时看到强信号和弱信号，而且他们之间能够保持比较好的定量关系，一般动态范围采用数量级来表示，数量级越大表示动态范围越宽。简单来说，动态范围表示一个图像中最亮和最暗的比值，动态范围值越高，CCD性能越好。

5 光圈值

光圈用来控制透过镜头进入机身内感光面的光量，它的大小决定着通过镜头进入感光元件的光线的多少。光圈F值为焦距与镜头直径的比值，F值越小即镜头直径越大，光通量越大，灵敏度越高。

北京百晶生物技术有限公司

1  百晶生物化学发光成像分析系统有5款在售型号，有一体机与分体机可选。迷你小巧的机身，大大节省实验空间。高灵敏科研级制冷CCD，大光圈镜头，保证成像质量。可支持化学发光成像分析、凝胶成像分析、蛋白凝胶成像分析、多色荧光成像分析等，满足多种实验需求。

2  正在使用的客户：

北京医科大学；东北大学；华中农业大学；中山大学；西安交通大学；西北大学；兰州大学；武汉大学；首都医科大学等等客户

3  优秀的成像结果：