一种新的秀丽隐杆线虫成虫的光片活体成像方法

一项新的协议将秀丽隐杆线虫幼虫和成虫使用荧光薄片显微镜的实时成像时间从20分钟延长到2小时以上，同时避免了标本中的热应激。

　　

   

   

图片:被胚胎包围的成年线虫(秀丽隐杆线虫)的程式化图像。    

。—活体成像研究的美妙之处在于标本是活的，可以随着时间的推移记录细胞分裂和胚胎发育等动态。

然而，活体成像研究的挫折在于标本是活的——扭动、扭曲、逃离视野。而且，它很脆弱，容易被成像设备热损坏或死亡。

MBL成像研究专家Carsten Wolff说，最近MBL胚胎学课程出现了解决这一困境的技术方案，这是“MBL合作努力的一个经典例子”。

“在2021年的胚胎学课程中，我们开始开发一种能让我们成像成人的技术秀丽隐杆线虫通过使用光片显微镜，可以更长时间、高分辨率地观察蠕虫，”沃尔夫说。一组课程教员和工作人员与MBL成像人员合作，在2022年的课程期间微调了协议，并撰写了论文。   

秀丽隐杆线虫是生物学和生物医学研究中很受欢迎的生物。光片荧光显微镜(LSFM)已经非常成功地捕捉到胚胎过程秀丽隐杆线虫以及在小鼠和斑马鱼身上。但是一旦生物体孵化出来，LSFM就有了局限性。

困难在于样品的安装。由于其光学特性，低熔点的琼脂可以很好地作为大型生物体的样品培养基，但小蛔虫倾向于钻进软琼脂并消失。因此，在此协议之前，成人最长的LSFM成像时间秀丽隐杆线虫已经20分钟了。新的方案将这一时间延长到两个多小时，同时避免了标本中的热应激。

“我们描述的创新本质上是两种已知安装方法的结合，”沃尔夫说。“一种是生物聚合物，在样品制备过程中它是粘性的，但一旦你将它暴露在紫外线下，它就会变硬并保持样品(在这种情况下，秀丽隐杆线虫)固定。第二部分是在塑料管中安装方法，允许使用光片显微镜。这种组合可以让人逼真地想象成年人秀丽隐杆线虫超过2小时。听起来时间似乎很短，但由于之前固定标本的问题，这是不可能的。此外，由于标本的身体不断运动，从不同角度进行成像是不可能的。”

该团队使用该协议对感觉神经元的树突分支和修剪进行时间推移成像。他们希望它能更好地对其他重要的细胞和发育过程进行实时成像研究，如生殖干细胞生物学、细胞迁移、细胞分裂和细胞入侵。该协议可以推广到其他生物，几乎不需要修改。