在流式分析中排除doublet，我们可能做错了

　　

多年来，研究人员一直采用流式细胞术（flow cytometry）来分离不同类型的免疫细胞，如T细胞、B细胞和单核细胞。他们偶尔会看到两个细胞粘在一起，这种现象被称为“doublet”。许多人认为这是分析中的假象，在收集数据前往往排除这些连体细胞。

不过，美国La Jolla免疫学研究所的科学家近日深入研究了doublet，并发现了它们与疾病之间的关联。他们在《eLife》杂志上报告称，患有严重结核病或登革热的人往往有着更高水平的doublet。

原来，这么多年，我们对doublet一直有着深深的误解。doublet的存在也解释了部分免疫细胞似乎显示出两种不同免疫细胞的基因表达。La Jolla免疫学研究所的Bjoern Peters教授表示：“你再仔细看看，那真的是两个细胞。”

在分析结核病患者的血液样本时，研究人员发现结果让人费解。流式细胞术实验表明，这些患者的免疫细胞具有单核细胞和T细胞的双重特征。在登革热患者的血液样本中，他们又发现了同样奇怪的细胞。

博士后研究员Julie Burel意识到，高水平的双重表达子（double expressors）可能与患者的疾病进展相关。她的后续实验表明，这些细胞实际上是由单核细胞和T细胞粘在一起组成的连体细胞。

于是，研究人员开始在更多样本中寻找这些doublet。他们发现，尽管最近感染的患者往往有着更多的doublet，但doublet似乎存在于每个人体内。“我们分析过的每一份血液样本都含有doublet，”Burel说。

可是为什么花了这么长时间才发现它们？“如今，仪器的灵敏度要高得多，所以我们才能看到十年前没人发现的东西，”Peters说。

Peters解释说，如果你考虑到T细胞在体内的作用，那么doublet的存在是完全合理的。“T细胞的作用是监控其他细胞的情况，检测甚至杀死被感染的细胞，因此它与其他细胞结合是很有意义的，”Peters说。

在结核病和登革热发生时，单核细胞成为疾病的储存库，因此T细胞很有可能与单核细胞接触并形成doublet。Peters认为这种现象可能与更多的疾病有关。毕竟，感染促使免疫细胞更密切地沟通和互动。这也意味着它们更有可能形成doublet。

正如Peters所说：“任何细胞都不是一个孤岛。”这项新研究激发他们跳出以往的单细胞分析，开始收集doublet的更多数据。

目前的问题是测定doublet是否能够让研究人员在患者出现症状之前就发现疾病。这对于阻止登革热等快速传播的疾病至关重要。doublet也可以显示疫苗何时引发有效的免疫反应，这有助于加快疫苗研究。“对任何免疫扰动而言，doublet都可能成为生物标志物，”Burel说。（生物通 薄荷）

原文检索

Circulating T cell-monocyte complexes are markers of immune perturbations

eLife 2019;8:e46045 DOI: 10.7554/eLife.46045