线性文库也能上DNBSEQ测序，限时免费环化，无损兼容，数据更真实！

大家都知道，DNBSEQ平台的核心竞争力体现在，采用独特的线性扩增技术，每次扩增都是以原始的DNA单链环为模板，有效地避免了PCR扩增错误指数积累的问题，保证测序的高保真性，因此上机文库为独特的环状文库，区别于市场上其他商业建库试剂盒构建的线性文库。（注：BGISEQ-500、MGISEQ-2000等华大自主测序平台都是基于DNBSEQ™技术，所以统称为DNBSEQ平台。）

也正因为这种独特的优势，DNBSEQ平台拥有高准确度和敏感度、超低Dup率、无index hopping担忧，已经助力500多篇高质量文章发表、多次上榜《Nature》《Cell》等高分期刊。

很多老师都被DNBSEQ平台强大的性能吸引了，但又担心新的建库方法太难操作，如果用了市场上其他的商业试剂盒建库，还能用DNBSEQ平台测序吗？

放心，完全没问题，不仅能测，数据表现还更优秀！科技君这就从原理和数据上向您一一介绍！（文末有惊喜！）

一、原理上，环化没有改变接头和序列

用通用文库转换试剂将其他商业试剂盒构建的线性文库，转换成兼容华大测序平台的单链环状DNA文库，上DNBSEQ平台测序。

如图1所示，通用文库转换试剂的引物与线性文库两端接头序列互补，双链变性成单链并环化，得到环状文库，随后以环状文库为模板扩增，因而环化过程只是对文库环化，没有对接头进行替换或增加，文库序列没有变化。

图1 线性文库环化后在DNBSEQ平台测序

二、数据上，更多的真实InDel，超低Dup rate

1.测序准确性高。

DNBSEQ™技术的核心为DNB （DNA Nanoball，DNA纳米球）测序技术，采用独特的线性扩增模式，始终以同一条DNA为模板，避免了指数扩增带来的错误累积，有效提高测序准确度。

文库环化后上DNBSEQ平台测序（文库环化-1、文库环化-2），Q30和基因组比对率都很高，与DNBSEQ文库直接测序的结果相当。这说明文库环化是无损兼容的。

图2 不同文库Q值、GC含量和基因组比对率比较

2.检测到更多的真实InDel。

PCR扩增反应常伴有碱基错配、复制滑动等事件发生，导致转换、颠换、插入、缺失等类型的碱基序列复制错误。DNBSEQ™使用扩增错误率极低的DNA聚合酶进行线性等温滚环扩增，并且始终以同一条DNA分子为模板，即使有复制错误也很难积累，从而降低InDel测序的错误率。

文库环化后，DNBSEQ测序检测到的真实InDel数量及InDel检测的灵敏性表现与DNBSEQ文库相当，并明显好于其他平台。这说明文库环化是无损兼容的，同时保留了DNBSEQ平台数据更真实的优势。

图3 不同文库的高置信区真实InDel数量及检测灵敏性比较

3.Dup率低，可用数据多。

Dup即重复序列duplicate reads，指通过测序得到两对或两对以上的Pair-End Reads同时比对到参考基因组上相同的起始和结束位置的序列。这些重复序列在总测序序列中占比，称为dup率（dup rate）。

DNB在溶液里面完成制备，在loading过程中没有聚合酶、引物和dNTP等PCR条件，所以DNBSEQ平台的dup率很低。文库环化后，DNBSEQ测序得到的dup率低至1.25%，明显比在其他平台测序低（11.03%）。这说明文库环化保留了DNBSEQ平台低dup rate独特优势。

图4 不同文库的Duplicate rate（%）比较

4.多种文库类型都能做。

多种文库类型都可以上DNBSEQ平台测序哟，不用担心受限制。

图5 多种文库类型都可以在DNBSEQ平台测序

*不仅限于以上文库
*以上展示数据均为文库环化后在DNBSEQ平台测序数据

原理简单明了，数据结果有保障！线性文库上DNBSEQ平台测序，无损兼容环化，更保留DNBSEQ平台的独特优点，数据更胜一筹！

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