《Cancer Letters》发现治疗ICC新靶标

　　

肝内胆管癌（ICC）是引起原发性肝癌的重要原因之一。由于化疗的无效性和术后生存率的低比例，寻找治疗ICC的有效靶点一直是科学家关注的重点。来自浙江大学医学部的研究人员通过临床样本，细胞系功能实验的研究，发现PDZ binding motif（TAZ）的异常表达与病人生存率相关，且通过调控p53/CYP24A1 pathway 影响细胞凋亡和对Vitamin D3 的敏感性。该研究的发现为治疗ICC提供了一个新的治疗靶标。

研究思路

研究结果

1. TAZ在病人中的表达模式特征

TAZ被发现是Hippo-related pathways的核效应靶点而调控器官大小，肿瘤干细胞性能和肿瘤发现。但是，TAZ是否与ICC有关联，目前还没有相关研究。研究人员首先在41对ICC病人组织样本进行了免疫组化实验，发现tumor grade和tumor stage与TAZ表达呈正相关。

对12对ICC样本进行RT-PCR验证发现，TAZ mRNA的表达在肿瘤组织中明显高于癌旁组织。对41个病人术后生存率分析显示，高表达TAZ组伴随着低生存率，而低表达组的相对生存率明显高。因此，TAZ的表达与ICC有着密切的关联。

2. 敲降TAZ细胞系表型分析

为探究TAZ表达与ICC发生的关系，研究人员首先在ICC细胞系中分析了蛋白表达，发现在CCLP-1和RBE中显著高于TFK-1和HCCC-9810细胞。因此，在CCLP-1和RBE中进行了TAZ的敲降。结果显示，敲降TAZ后细胞活性被显著抑制。

流式细胞分析表明，敲降TAZ后，细胞凋亡增强，G1 phase阻滞增加。Western blot检测限制，Bak, Bad, Bax, caspase 3的表达显著上调，CDK2，CDK4，cyclin D1表达下调，因此，TAZ的敲降影响了细胞的增殖，凋亡和细胞周期过程。

3. TAZ调控下游基因筛选

那么，TAZ是调控了下游哪些基因的表达而影响细胞的上述生物学功能呢？通过全基因组表达谱芯片（该研究中Affymetrix Human U133 plus2.0 array芯片服务由上海伯豪生物技术有限公司提供），研究人员发现CYP24A1的mRNA表达在TAZ敲降后显著下调。RT-PCR和western bolt实验，进一步验证CYP24A1在敲降后显著下调。CYP24A1在ICC肿瘤组织中的表达与TAZ正相关。因此，CYP24A1是潜在的TAZ作用下游靶基因。

4. TAZ影响ICC细胞对vitamin D的敏感性

通过对ICC细胞处理vitamin D，研究人员发现细胞活性受到抑制。而在TAZ敲降后，ICC的敏感性增加。当在细胞中处理si-TAZ时，同时处理vitamin D，发现两则是一种协同增强作用。因此，TAZ的降低增强了ICC细胞对vitamin D的敏感性。

5. TAZ调控网络分析

那么，TAZ是怎么样调控CYP24A1和VDR（vitamin D receptor）呢？结果显示，敲降TAZ降低了VDR的表达，升高了p53, p27, p21的表达。vitamin D可以有效下调VDR，CYP24A1，TAZ的表达，上调p53的表达。当以si-TAZ, vitamin D3, si-TAZ+ vitamin D3处理细胞时，在组合组中，p53和p21显著增加，VDR和CYP24A1显著降低。xenograft实验来源肿瘤的免疫组化检测也表明p21, p27, p53, Bak, Bax表达增加，而CYP24A1, VDR, Bcl-2, CDK2 , Ki-67表达降低。此外，通过构建si-CYP24A1，发现TAZ表达降低，VDR不变。当增加Nutlin3a（MDM2拮抗剂）量，p53表达逐步上调，TAZ和CYP24A1表达逐步下调。当将p53进行siRNA设计时，CYP24A1表达上升。因此，在ICC中，可能是由于TAZ通过抑制p53的表达，影响了对于Vitamin D3的敏感性，抑制了细胞凋亡和细胞周期。

研究结论

本研究通过对临床样本分析，发现TAZ的表达与病人生存期，肿瘤分期显著相关。利用敲降细胞系，发现TAZ通过影响p53/CYP24A1 pathway ,影响了细胞的凋亡，细胞周期和对vitamin D的敏感性。该研究在ICC中发现了一个潜在的治疗靶点，为治疗ICC提供了新的思路。

原文出处：Xiao H, Tong R, Yang B, Lv Z, Du C, Peng C, Ding C, Cheng S, Zhou L, Xie H, Wu J, Zheng S. TAZ regulates cell proliferation and sensitivity to vitamin D3 in intrahepatic cholangiocarcinoma. Cancer Lett.2016.