Clontech推出染色体步移新品[新品推荐]

染色体步移（DNA walking）是一种简单的方法，可获得与已知基因组序列相邻的未知序列。例如，我们可以找到基因上游的调控序列，或确定转座子或病毒的整合位点。近日，Clontech公司推出了Universal Genome Walker 2.0 Kit，让研究人员可将这种方法用在任何物种上。

特点：

• 获得启动子或调控序列
• 定位内含子/外显子交界
• 确定转座子或病毒的整合位点
• 确认利用锌指核酸酶、TALEN或其他方法开展的基因组修饰

Universal Genome Walker 2.0 Kit包含了构建GenomeWalker文库以及开展步移反应所需的所有试剂。除了文库构建的组分，它还包含了耐热DNA聚合酶预混液，以及纯化基因组DNA和消化后DNA的材料。试剂盒中包含构建3种不同材料基因组文库及80次步移反应的所需试剂。

操作过程的第一步是构建连有接头序列的基因组DNA片段，它们称为GenomeWalker文库。起始的基因组DNA必须非常纯净，且有着高的平均分子量。因此，试剂盒中附带了NucleoSpin Tissue kit及对照。DNA分别采用4种限制性内切酶酶切，并且连有专门设计的GenomeWalker Adaptor。

在构建好文库之后，每个文库只需两次PCR扩增，即可完成。第一次PCR使用试剂盒中提供的外侧接头引物（AP1）以及研究人员提供的外侧基因特异引物（GSP1）。PCR产物经过稀释，并作为第二次PCR的模板。第二次PCR使用AP2和GSP2进行扩增。这样，每个DNA片段从GSP2 5’端的已知序列开始，并延伸到未知的基因组DNA。通过测序、克隆，可进一步分析。

在PCR扩增时，最好使用适合长距离PCR的DNA聚合酶。因此，试剂盒中附带了Advantage 2 PCR Kit，其中包含两种耐热DNA聚合酶，一种负责延伸，而另一种负责3’-5’的校正。经过长距离PCR的扩增，PCR产物可达6 kb。

通过这种方法，在不到一周的时间内，您可以获得任何物种中与已知DNA序列相邻的基因组序列。除了获得启动子和调控序列，GenomeWalker染色体步移还能定位内含子/外显子交界，并确认利用锌指核酸酶（ZFN）、TALEN或其他方法开展的基因组修饰。

据介绍，尽管单个步骤的产物限于6 kb，但多个步骤可串在一起，形成更长的产物。因此，这种方法可填补基因组图谱中的缺口，特别是利用传统的文库筛选方法难以获得缺失克隆时。（生物通 薄荷）

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