《科学》：qPCR创新技术及操作指南

　　

生物通报道：qPCR（Quantitative PCR，定量PCR）技术的诞生无疑是生命科学研究领域的福音，这种准确度，灵敏度高的方法解决了不少实验难题，获得了大量重要的研究发现。随着科学家们的深入探讨，以及新型仪器的出现，这项技术也获得了不少创新发展，最新一期（10月7日）Science杂志就以“qPCR Innovations and Blueprints”为题，介绍了这方面的新发展，也提供了qPCR的实验操作指南（从实验设计到分析前样品收集，以及数据处理和结果公布）。

文章指出，qPCR技术能快速获得大量高质量数据，从而使得微流体（Microfluidics），以及微型化技术（miniaturization）成为可能。这种平台是发展高通量和高灵敏度技术（比如数字PCR，和单细胞分析）的工具，研究人员能利用这些方法解决遗传学，和癌症生物学中的难题，获得新的研究和分析检测成果。

创新技术

数字PCR（digital PCR）这一新技术的已经出现一段时间了，早在1997年，Kalinina等就描述了这一方法，之后Vogelstein等在美国PNAS发表了第一篇针对“Digital PCR”的文章。

这项技术由于采用了这种独特的定量方式，其在检测Copy Number Variation （CNV）方面有很大的优势。Nature Methods上面的一篇文章阐述了对这一技术的重大改进，有效了增加了反应槽的数量，使其密度达到了普通数字PCR的100倍。由于反应密度的增加，其准确度也相应的增加。这一被称作百万像素数字PCR的技术的检测范围（dynamic range）达到107，能够检测到十万分之一的突变，以及1%的染色体异常。

操作指南

MIQE qPCR app（免费）这项应用是由Bio-Rad公司赞助，慕尼黑工业大学的Michael W. Pfaffl教授和拉萨尔–博韦综合理工学院的Afif Abdel Nour副教授这两位实时定量PCR方面的专家开发的，目前可从苹果的App Store商店免费获得。这项新的应用为研究人员提供了必要的资源和核对表，以确保他们的qPCR实验遵从MIQE。

MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）， 简称mykee，是一套在国际上最新推出的指导方针，就评价QPCR实验和发表文章时所必需的实验信息提出了最低限度的标准, 也提供了一个出版时所要附带的checklist。

MIQE qPCR app帮助研究人员实现了qPCR实验的准确、透明和可靠。该应用中不同颜色的核对表区分了必要和可取的MIQE要求，并直观地显示了过程。用户可直接链接到MIQE相关的文献，或者通过电子邮件向专家询问有关qPCR或MIQE的问题。应用中有着最新的qPCR资源、参考文献和新闻。

（生物通：万纹）

原文摘要：

LIFE SCIENCE TECHNOLOGIES: qPCR Innovations and Blueprints
Chris Tachibana
Summary
Quantitative PCR users can rapidly generate large amounts of high-quality data with new instruments and products made possible by microfluidics and miniaturization technology. These platforms are the tools for developing techniques that require extremely high throughput and sensitivity such as digital PCR and single-cell analysis. Researchers are adopting these methods to ask sophisticated questions about genetics and cancer biology as well as to develop novel research and diagnostic assays. As qPCR innovators explore new frontiers and everyday users venture into more complicated workflows, international groups of industry and academic partners are keeping us on the path of best practices. Two consortia are generating guidelines on the qPCR process--from experimental design and pre-analysis sample collection, to processing data and publishing results. The guidelines are blueprints that ensure reproducibility, validity, and transparency.