专家是如何富集低丰度蛋白的（三）

如何打倒高丰度蛋白这个巨人，发现其身后躲藏的低丰度蛋白呢？Bio-Rad公司开发出ProteoMiner蛋白富集技术，能够降低高丰度蛋白的水平，助您发现低丰度蛋白的秘密。如今，这项技术已经走向全球，应用在多个蛋白质组学实验室中。这一次，Bio-Rad公司请来三位蛋白质组学方面的专家，谈谈他们是如何应用ProteoMiner技术的。

　　

鉴定与疾病相关联的蛋白难度颇高，因为样品中的少数几种高丰度蛋白在总蛋白中占了很大的比例。以临床研究中常用的血清和血浆为例，蛋白浓度范围跨越了11个数量级。而且，20种最高丰度的蛋白占据了总蛋白量的97-99%。如此一来，有价值的生物标志物就变得难以寻觅了。

如何打倒高丰度蛋白这个巨人，发现其身后躲藏的低丰度蛋白呢？Bio-Rad公司开发出ProteoMiner蛋白富集技术，能够降低高丰度蛋白的水平，助您发现低丰度蛋白的秘密。关于此项技术，生物通之前曾做过详细报道，请看《揭开低丰度蛋白的秘密》这篇文章。如今，这项技术已经走向全球，应用在多个蛋白质组学实验室中。这一次，Bio-Rad公司请来三位蛋白质组学方面的专家，谈谈他们是如何应用ProteoMiner技术的。

Ben Herbert博士（澳大利亚）——探索无边界

Ben Herbert博士的求学经历可有些与众不同。他最初毕业于一个专科学校，第一份工作是实验室技术员，负责检测新西兰食品行业的香肠含量。第一份工作及教育水平对与Herbert而言似乎已经足够了，直到他参与了一项鉴定食品蛋白的研究。这项研究突然激发了他对蛋白分离技术的兴趣，随后他继续求学，最终获得了生物化学博士学位。现在Herbert是悉尼科技大学蛋白质组技术中心的主任。

一开始当Bio-Rad让Herbert试试ProteoMiner 蛋白富集试剂盒时，Herbert显得颇不以为然。“我们并不是做很多血清和血浆的工作，我们只是试试它，验证它是否能行。”不过这些预实验的成功引起了他的兴趣，“我们还能用它做什么？”

很快，一项关于壁虱的研究成为了第一选择。这种小动物主要在澳大利亚的东海岸发现，别看它个头小，但它咬一口可能会引起瘫痪，甚至小猫小狗的死亡。研究使用的是饱食的壁虱。他们将它磨碎，并将匀浆与ProteoMiner磁珠混合，从高丰度动物蛋白中分离出壁虱特异的蛋白。最终目标是分离并鉴定出壁虱在饱食与禁食下的蛋白含量差异，从而鉴定出引起瘫痪的蛋白。

在该中心的另一个实验室中，研究人员正在研究隐球菌（cryptococcus gattii），一种可能致命的真菌。研究正比较天然状态下发现的真菌蛋白与那些提取自感染的肺、肝和肾样品的蛋白有何差异。如果不用ProteoMiner蛋白富集技术先处理一下组织样品，那么分离真菌蛋白将变得很困难。

对于蛋白质组技术中心来说，最大的挑战也许是利用ProteoMiner 蛋白富集技术研究膜蛋白。这种研究的难点主要有两个，膜蛋白丰度极低，且它们是疏水的。Herbert和同事使用增溶剂（甲醇和二硫醇）帮助溶解，然后利用ProteoMiner试剂盒捕获低丰度蛋白。据Herbert预测，大约30%的蛋白将是对细胞膜通透性很重要的蛋白。

结语

ProteoMiner蛋白富集技术正在全世界的实验室中广泛使用。随着低丰度蛋白的不断发现，科学家们有望找到多种疾病的生物标志物。如果您也对ProteoMiner技术感兴趣，欢迎索取详细的技术资料。