专家是如何富集低丰度蛋白的（二）

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鉴定与疾病相关联的蛋白难度颇高，因为样品中的少数几种高丰度蛋白在总蛋白中占了很大的比例。以临床研究中常用的血清和血浆为例，蛋白浓度范围跨越了11个数量级。而且，20种最高丰度的蛋白占据了总蛋白量的97-99%。如此一来，有价值的生物标志物就变得难以寻觅了。

如何打倒高丰度蛋白这个巨人，发现其身后躲藏的低丰度蛋白呢？Bio-Rad公司开发出ProteoMiner蛋白富集技术，能够降低高丰度蛋白的水平，助您发现低丰度蛋白的秘密。关于此项技术，生物通之前曾做过详细报道，请看《揭开低丰度蛋白的秘密》这篇文章。如今，这项技术已经走向全球，应用在多个蛋白质组学实验室中。这一次，Bio-Rad公司请来三位蛋白质组学方面的专家，谈谈他们是如何应用ProteoMiner技术的。

Jules Westbrook博士（爱尔兰）——探究扩张性心肌炎背后的分子机制

1997年，蛋白质组学作为一个学科领域刚刚兴起，那时Jules Westbrook博士正在伦敦的布鲁内尔大学（brunel university）读书。Westbrook在全球知名的心肺移植中心Harefield医院工作了9个月，在那里他意识到蛋白质组学在心血管疾病上的应用可能会彻底改变对心脏病的了解和治疗。毕业之后，Westbrook加入了都柏林大学的移植蛋白质组学和神经蛋白质组学小组。

该小组的研究目标集中在了解心脏病中包含的分子过程，并鉴定出能作为诊断或预后的生物标志物或者治疗靶点。重点放置在会引起晚期心力衰竭的心脏病。Westbrook表示他们对扩张性心肌炎特别感兴趣。

研究小组特别想了解患有扩张性心肌炎后，心脏的基因表达有何改变，并利用蛋白组学技术对正常和患病心脏进行了比较，鉴定出差异表达的蛋白。人血清、血浆和组织样品都是这些项目的主要研究材料。Westbrook也表示，高丰度蛋白的遮蔽是很大的挑战。“目前也有一些方法来去除高丰度蛋白，不过这种非特异性的结合也有丢失目的蛋白的风险。”

当Westbrook及其同事了解到ProteoMiner蛋白富集技术后，他们很渴望了解这项技术是否能高重复性地减低高丰度蛋白。Westbrook谈到：“到目前为止，我们已经利用人血浆和血清检验了这个试剂盒。我们在比较了处理及未处理的样品后，印象极为深刻。”

结果清晰地显示，高丰度蛋白减少，低丰度蛋白得到富集。而且，重复性也得到验证。Westbrook处理了同一样品的不同量，结果在2-D胶上产生了相同的蛋白图像，表明同一蛋白的保留程度相同。

研究小组正在对初步结果进行统计学分析，并将利用质谱来尝试鉴定新发现的斑点。Westbrook认为，试剂盒将产生一些有趣的结果。

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