四军医大首次构建成永生化胚胎肝细胞系

　　第四军医大学唐都医院感染病中心李羽博士等采用脂质体转染法，在国内首次构建成功一株“永生化胚胎肝细胞系”。该细胞系的建立，为生物人工肝及肝细胞移植的临床应用，提供了理想的细胞材料和崭新的思路。

　　据介绍，原位肝移植是治疗肝功能衰竭的惟一有效手段，但由于技术复杂、价格昂贵，特别是供肝短缺等原因，使其临床应用受到限制。生物人工肝及肝细胞移植，虽可作为一种有效的替代手段，却也因细胞材料量少的问题而受到影响。因此，加强肝细胞移植材料的研究已成为人们关注的热点。

　　为探讨肝功能衰竭治疗材料来源的新方法，李羽博士等研究人员采用脂质体转染法，将SV40T基因和真核表达载体pcDNA3.1，转染至体外分离培养的人胚胎肝细胞，再通过G418培养液筛选、传代培养、细胞克隆及基因整合等一系列技术处理，在40天后终于克隆出一株具有原代肝细胞特征的永生化胚胎肝细胞系。

　　经检测，该细胞系原代胚胎肝细胞存活率达91%。体外培养48小时后，可见80%贴壁，细胞呈椭圆形，核仁增大，胞内含有丰富的糖原颗粒，细胞极性恢复，可见毛细胞管重建，细胞克隆形成率为31.2%。经染色体核型分析，第16、28、45代肝细胞各计数30个分裂相，均为正常二倍体细胞，染色体为23对，核型结构与正常人肝细胞相同。免疫组化检测证实，SV40T基因已整合入胚胎肝细胞，该永生化肝细胞已具备合成白蛋白的能力，提示克隆的永生化胚胎肝细胞株不仅构建成功，而且其重组质粒、细胞形态及染色体核型等各项功能指标良好。

　　研究人员认为，利用脂质体转染法建立的该永生化胚胎肝细胞系，特征明显，增殖较快，克隆形成能力强，没有恶性转化，具备了原肝细胞的典型形态特征和正常肝细胞的某些功能，为肝细胞体外长期培养以及功能维持提供了可能，从而使其成为理想的细胞材料，给生物人工肝及肝细胞移植的临床应用奠定了基础。