本期《遗传》精选

　　

生物通综合：

贲门癌中染色体8p21-p23杂合性丢失的研究 

摘要  目的 研究贲门癌中染色体8p21-p23杂合性丢失的情况。方法 采用激光捕获显微切割技术获得均质的肿瘤细胞及正常的胃粘膜细胞，多重置换扩增技术扩增捕获细胞的基因组DNA。PCR结合硝酸银染色方法分析19例贲门癌染色体8p21-p23的杂合性丢失。结果 在贲门癌中染色体8p21-p23的缺失频率非常高（63.2%），我们确定了一个最小丢失区域. 结论 进一步明确此最小丢失区域内的抑癌基因将有助于贲门癌发生机制的阐明。

无精和严重少精症患者的遗传缺陷分析---附2例世界首报染色体异常核型
 
摘要  对217例无精和严重少精症患者外周血淋巴细胞染色体核型进行分析，并采用聚合酶链反应对7例Y染色体结构异常患者的AZFc区进行检测。发现187例无精症患者中检出异常核型77例（41.18%）（其中46,XY,t(6;14)(p21;p13)，46,XY,t(8;12)(p21;q24)为世界首报核型），主要涉及染色体异常（数目异常和结构异常）；染色体异态（Y染色体异态和9号染色体臂间倒位）及46,XX性反转；30例严重少精症患者中检出异常核型4例（13.33%）（结构异常和46,XX性反转）。由此可见，性染色体数目和结构异常是精子发生障碍的主要原因，其次常染色体的某些断裂点也可能影响精子发生。AZFc区的缺失与否与精子发生也有直接关系。

5个与猪产仔数相关基因的效应分析
 
为了比较不同基因对猪产仔数效应大小，在相同的大白 （158头）、长白 （224头）猪群中采用PCR-RFLP法进行了ESR、FSHβ、PRL、PRLR、NCOA1 5种与产仔数相关基因的基因型频率检测及不同基因型的总产仔数和产活仔数效应分析，结果表明，对相同母猪群产仔数影响效应最大的是PRLR和NCOA1基因，AA型比BB型母猪总产仔数高2.28~3.33头（P<0.01），产活仔数高1.57~3.30头（P<0.01），其次为ESR和FSHβ基因，BB型比AA型母猪总产仔数高0.55~1.18头（P<0.05，长白例外），产活仔数高0.37~1.20头（P<0.05）。PRL基因对产仔数效应不显著。
 
粪便取样对亚洲黑熊脑源性神经营养因子基因全长序列分析 

沿用本室改进的粪便提取方法，参照马来熊BDNF基因序列设计引物，首次从亚洲黑熊粪便DNA中扩增和克隆到包含完整核BDNF基因的753 bp片段，以毛发作阳性对照并进行重复实验，获得稳定一致结果。序列分析表明，亚洲黑熊的BDNF基因非常保守，与人相比，一致性达94.5%，与大熊猫比达98.9%。在推导的多肽序列中，其成熟区氨基酸序列与所有已报道哺乳动物的完全一致；对亚洲黑熊及其相关物种BDNF基因序列的比较分析，发现大熊猫与包括黑熊在内的熊科动物亲缘关系更近，而与小熊猫较远。文章首次采用非损伤性取样法在分子生物学水平对亚洲黑熊基因组核BDNF基因进行分析，不仅为亚洲黑熊的保护和繁育提供重要参考资料，为非损伤性取样在珍稀濒危野生动物研究中的应用拓宽了思路，也为亚洲黑熊及其近缘种的系统分类研究提供分子证据。

遗传-家鹅线粒体tRNAthr与tRNApro序列与结构分析
 
摘要  本研究采用PCR和DNA测序技术测定了6个中国家鹅品种和2个欧洲鹅品种25个个体线粒体DNA tRNApro（69bp）和tRNAthr（68bp）基因的完整序列，通过对家鹅线粒体基因组的研究，首次报道了家鹅线粒体tRNApro和tRNAthr基因的结构，对鸿雁家鹅、灰雁家鹅、白额雁（Anser albifrons，序列号为AF363031）种间的tRNApro和tRNAthr基因的二级结构及序列的变异特征进行了分析，并通过家鸡（Gallus gallus domesticus，序列号为NC001323）与鸿雁家鹅间tRNApro和tRNAthr基因二级结构的比较，初步进行了鸡形目与雁形目两个目间tRNApro和tRNAthr基因二级结构及序列变异的分析。结果表明：家鹅tRNApro和tRNAthr基因均可折叠成标准的三叶草形二级结构； 2个tRNA基因三叶草结构的氨基酸臂、反密码子环在鸿雁、灰雁和白额雁种间以及鸡形目与雁形目两个目间没有发生变异，具有高度的保守性。本研究的结果将为进一步探讨家鹅线粒体DNA tRNApro和tRNAthr基因序列与结构、功能的关系奠定基础。所测定的基因序列已登录国际GenBank数据库，序列号为AY427800～AY427805和AY427812～AY427814。

黄鳝Hprt基因的克隆及表达分析

摘要 
次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hprt)参与嘌呤核苷酸的补救合成。采用RACE技术克隆了黄鳝的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因，它的全长cDNA 为1 452 bp，预测编码218个氨基酸，与人类、小鼠、鸡和斑马鱼等脊椎动物Hprt氨基酸序列之间的同源性超过76.7％。基于该基因氨基酸序列构建了进化树，显示与斑马鱼Hprt基因更同源。RT-PCR表明黄鳝Hprt基因在多种组织中广谱表达，表明黄鳝该基因在功能和进化上的保守性。
 
利用17个微卫星标记分析鳙鱼的遗传多样性

摘要  选用本实验室克隆的17个鳙鱼微卫星分子标记分析四川泸州和江西鄱阳湖的两个种群鳙鱼的遗传多样性及种质特性，计算和统计了杂合度、多态信息含量（PIC）、有效等位基因数、等位基因频率、遗传距离、遗传相似系数、Hardy-Weinberg平衡偏离指数等方面内容。结果表明：选择使用17个微卫星标记，其中有4个为单态标记，13个为多态标记。江西和四川鳙鱼群体每个微卫星位点的平均等位基因数分别为3.325及3.882，平均有效等位基因数分别为3.531及2.676，多态位点百分率分别为82.4及70.5， 17个微卫星标记共有等位基因71个，多态微卫星位点的PIC在0.114~0.960之间变动，平均为0.417 ，两群体位点平均观测杂合度为0.385和0.452，平均期望杂合度为0.360和0.422，两个群体间的遗传相似系数为0.897，群体间的遗传距离为0.109。

pib基因启动子及其诱导启动性初探
 

摘要  将pib基因上游5.7 kb区段取代pCAMBIA1301中gus基因上游的35S启动子构建了pib拟启动区-GUS+ 35S-hpt 基因表达载体pNAR604。经农杆菌介导转化水稻成熟胚愈伤，获得了转基因抗潮霉素愈伤和36株转基因水稻植株。 转基因抗性愈伤和转基因植株根的组织化学GUS活性检测表明，光照培养下的抗性愈伤和转基因植株根不能使X-gluc显色，而暗处理24 h后的抗性愈伤和定植后转基因植株的根能使X-gluc显色。转基因植株GUS荧光定量分析结果表明，GUS表达具有器官特异性，黑暗处理前根的GUS活性最高、茎次之，分别是是叶片的7倍和3倍，叶片中仅有痕量本底。24 h黑暗处理后根、茎、叶中GUS活性都有增加，且叶片中的增加比例最大，其活性仅次于根。5 mmol/L水杨酸和0.3 mol/L NaCl叶面喷施转基因植株24 h后叶片中GUS活性分别为处理前的2.7和3.6倍。初步确定pib拟启动区是一个诱导型启动子。黑暗、水杨酸和NaCl能诱导该启动子启动活性。

无载体框架序列转基因小麦中外源1Ax1基因表达框的遗传分析
 
摘要  为了研究无载体框架序列转基因小麦中转基因表达框的遗传规律，选育稳定表达的转基因株系，利用基因枪介导1Ax1基因的最小表达框转化得到了转基因小麦，对其后代转基因植株中1Ax1基因表达框的遗传进行了分析，结果表明：无载体框架结构的1Ax1基因在转基因后代中稳定遗传，在T1代中呈现3:1的分离，遵从孟德尔遗传模式；SDS－PAGE分析表明其中部分转基因后代分离出新的高分子量蛋白亚基分子量略低于1Dx5亚基。

一种构建基因组文库的改进方法
 
摘要  构建基因组文库是一项非常基础和重要的工作。但利用传统方法构建基因组文库存在操作步骤繁琐、背景高等问题。为了解决这些问题，对传统构建文库的方法进行了改进。由于Ear I位点经酶切后突出3个可变碱基，经过设计可使酶切后的两个粘端无法匹配，从而防止载体环化，所以用两个Ear I位点作为克隆位点。基因片段是通过用Sau3AI部分酶切基因组总DNA,并在部分酶切片段的3`凹端补一个碱基G获得，因此片段无法串连或环化。本实验构建了基于上述改进的ARS探针载体pHBM803/Trp，并分别用改进方法和传统方法构建水稻基因组文库进行比较。实验结果表明，经过上述两点改进可使文库质量大大提高。