【编者按】：为了鼓励更多的优秀论文在国内的核心刊物发表以及鼓励和发掘极具潜力的青年科学家，表彰优秀的实验成果，国内的一些核心期刊、生物产品厂家与生物通联合举办了这次中国05-06生命科技年度优秀论文评选活动。为了让广大读者能够从这次活动中了解更多的国内科研进展，同时了解更多的科研技术，生物通将对获得投票数较多的文章进行介绍。这次介绍的是新上榜文章。
候选论文：绿色荧光蛋白标记的表达载体pHisEGFP的构建 中国生物工程杂志 2005.9 Vol 25, No.9
文章摘要：
为对重组蛋白的表达进行直观检测并简化蛋白纯化的步骤，构建了能在大肠杆菌中表达融合蛋白的通用表达载体pHisEGFP。该载体含有源自表达载体pET32a的T7 启动子、终止子和源自质粒pUC18的ColE1复制子与绿色荧光蛋白报告基因。应用该载体成功地表达并纯化了酵母GGDP(geranylgeranyl diphosphate, GGDP)合酶融合蛋白，结果表明所构建的载体是一个实用的表达载体，并建立了离子交换层析和亲和层析两步纯化融合蛋白的方法。[投本文一票]
技术要点：
荧光蛋白技术在植物学研究中已被证明是一种强有力的工具。GFP最早是从水母中分离出来的(Aequorea victoria ,1992), 当其受到紫外或蓝光激发时，可以发出绿色荧光。水母GFP基因很稳定，无种属限制，已在微生物和动植物中得到表达发出荧光。目前，GFP基因已在大豆(Ponappa等，2000)、甘蔗(Elliot等，1999)、桔子(Ghorbel等，1999)、烟草(Molinier等，2000)、小麦(McCormac等，1998)、苹果(Maximova等，1998)等植物中作为转化筛选标记被广泛应用。
现有的报告基因主要有：β-半乳糖苷酶(Lac-z)、β-葡糖苷酸酶(GUS)、分泌型胎盘磷酸酯酶(SEAP)、萤火虫荧光素酶(LUC)等，但这些基因的检测都需要底物和辅助因子，因而在活体中的应用受到限制。绿色荧光蛋白(GFP)，是一种非酶性报告因子，该蛋白能够自身催化形成发色结构并在紫外或蓝光激发下发出绿色荧光。作为报告基因，GFP是目前能在活细胞中表达的发光蛋白之一。作为荧光标记分子，GFP既具有敏感的标记检测率，又没有放射性的危害。GFP检测方便，荧光稳定，易于构建载体且对活细胞无毒害，对目的基因的功能也没有影响，转化后细胞可以继续传代。目前，GFP被改造作为转基因植物的遗传标记，成为监测生物体内基因表达的的十分重要的报告因子。
EGFP，即增强型绿色荧光蛋白，是一种最佳化的突变型GFP，这种组成型表达的蛋白由于其在生物体内没有特异性，因此利用488nm波长的光激发可以使表达EGFP或EGFP融合蛋白的组织、器官、或更细微的亚细胞结构发出绿色荧光。这种技术已经被使用到了许多方面（另外Stratagene公司开发出了升级版GFP：hrGFP II，可以发出比EGFP更光亮的荧光）。
人物链接：
程克棣（中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所,卫生部天然药物生物合成重点实验室）
毕业于北京大学生物系植物生理生化专业。曾在中国科学院上海植物生理研究所工作，1978 年开始在中国医学科学院药物研究所工作。期间在美国德克萨斯农工大学化学系作访问学者。 作为课题负责人先后承担国家自然科学基金，卫生部基金等并参加863项目专业。
专业领域：生物 技术药物，天然药物生物合成及代谢途径工程，研究用生物技术方法进行药物会或其中体 生产，药物先导发现及天然产物结构修饰。
工作内容：应用微生物 发酵与植物细胞培养获取化合物； 应用不同微生物和植物培养系统进行天然产物结构修饰； 克隆药用植物功能基因应用与代谢途径工程，探索药物获取药物先导物的新途径。
主要论著：
