北京成功研发一荧光RT-PCR技术

北京成功研发一荧光RT-PCR技术

　　

荧光RT-PCR技术：4小时能知是否感染狂犬病 
 

 本报北京12月13日电 一种通过分析活体犬猫唾液样本可在4小时内检测出是否感染狂犬病病毒的荧光RT-PCR技术，近日由北京检验检疫局张鹤晓研究员主持研发成功。12月13日，该课题通过了国家质检总局科技司组织的专家鉴定。
　　鉴定委员会一致认为：该课题在国内率先建立了具有自主知识产权的狂犬病病毒荧光RT-PCR检测技术。课题实验设计合理，方法科学，数据完整，结果可靠，为我国狂犬病病毒的快速检测提供了一种新的可靠方法，总体达到国际先进水平。建议进一步扩大临床样品的检测与应用，尽快申报新兽药证书。

　　据了解，用传统的检测方法，检测时间至少应2天，而该技术在国内首次将TaqMan快速荧光RT-PCR检测技术用于动物源性狂犬病病毒的快速检测，4个小时就能得到检测结果，为及时发现携带狂犬病病毒的犬猫争取了时间。同时，这种检测方法可检测样品中极微量的病毒。与传统的普通RT-PCR检测方法相比较，该方法的灵敏度可提高100倍左右。此外，这种检测方法还克服了传统检测方法中对犬猫脑组织切片实施检测导致的方法繁杂、灵敏性差的弊端。

　　专家称，该检测技术的建立，为我国狂犬病病毒的快速检测提供了一种新的可靠方法，对于狂犬病疫情的防控具有重要意义。

 
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GreeneChip System新的病原菌筛检系统 

  哥伦比亚大学的Greene感染性疾病实验室(Greene  Infectious  Disease  Laboratory)开发一个新的检测芯片系统GreeneChip  System，能快速且灵敏的筛检病人组织、血液或尿液中的各种病原菌，包括细菌或病毒等等。此研究成果将发表于2007年1月的CDC’s  Emerging  Infection  Diseases，亦可参考12月6日的电子文章，网址如下：www.cdc.gov/EID/13/1/06-0837.htm。  

        旅游及贸易的全球化使疾病的感染及传播问题更严重，而临床诊断的速度及专一性，无法快速且正确的替病人进行诊疗，因此，开发快速且准确的检测系统变得格外重要。GreeneChip有数万种病原菌的基因序列数据，分析流程不需超过10小时。起初用于测试病人呼吸道及尿道的感染性疾病，例如：出血热(hemorrhagic  fever)或结核病(tuberculosis)等，其分析结果都和传统方法(如培养法或PCR测试法)一致。  

        在一个临床挑战的实验中，GreeneChip也被用来测试类似病毒性出血热(viral  hemorrhagic  fever，VHF)病人的样本，病人若受到Marburg病毒感染6~8天内就会导致急性出血热，且常造成病人肝损伤、神经错乱或休克。在安哥拉(Angola)自2004年10月到2005年6月就造成252个病例，且致死率高达90%。其中一个非政府组织的劳工感染后一星期内就死亡，以PCR的方法分析其血液检体中的RNA，并未测得Marburg病毒。相同的检体以GreeneChip系统检测，也得到一样的结果。不过，透过GreeneChip的比对分析，郄发现这些RNA序列与造成疟疾的疟原虫极为相近，也证实该名死者确实罹患了疟疾。  

        研究人员强调，GreeneChip系统能快速又准确的鉴定病原菌的种类，因此较不会担误病患治疗的时机。虽然检测芯片系统尚不能取代现行传统病原菌筛检法，但此系统仍可作为现行筛检平台之快速辅助工具，以抢救急性病患的宝贵生命。
 
 
干细胞反转录PCR分析 

  在近期的《美国科学院院刊》杂志网站上公示的一篇研究论文中，斯坦福大学、瑞典隆德大学的研究人员描述了他们对发育中的祖细胞（干细胞）群中转录因子表达进行的一项系统、定量分析。

        研究人员利用一种以微流控芯片为基础的“数字化RT-PCR”来分析这种干细胞中的转录因子表达情况。这种分析能够计算从单个细胞制备的cDNA样本中的模板分子。

        通过对五种处于早期发育阶段的造血前体细胞进行分析，研究人员发现造血干细胞中转录因子PU.1的表达有明显的变化，并且flk2-和flk2+共同骨髓祖细胞中PU.1表达的模式不同。

        这项分析还揭示出在被研究的细胞群中，GAPDH转录本水平存在明显的差异。这项研究是对内在控制的正常表达数据的说明，并且也突出了在一种绝对单细胞单拷贝基础上进行基因分析的必要性。（生物通杨遥）

《自然》：转录因子功能新发现

        已经知道，哺乳动物类Kruppel转录因子（KLF2,Kruppel-like  transcription  factors）与几种组织类型的最终分化的调节密切相关。转录因子KLF2长期被认为在控制成熟T细胞的存活和静止中扮演一个关键角色。因为缺乏KLF2的T细胞在胸腺中虽能形成，但无法进入周围淋巴器官。这意味着KLF2能调节T细胞的静止和存活。

        但是现在，美国明尼苏达州大学和辛辛那提州大学一项新的研究对这种表型提出了另一种新的解释。他们证实KLF2是T细胞迁移的关键。研究的结果发表在7月20日的《自然》杂志上。