运用分子生物技术重组卡介苗

　　结核病（TB）仍然是威胁人类生命健康的重要疾病之一。目前，唯一获准用于预防结核病，并且普遍使用的疫苗是卡介苗（BCG）。经过多年的实践，BCG对成年人保护效果差异较大。尽管如此，其他新型疫苗的保护效果仍然不能超越现有的BCG。因此，对现有的BCG进行合理的重组改造，是结核病疫苗的研究方向之一[i]。

  迄今为止，在BCG改造方面越来越得益于现代分子生物学的研究手段和成果，即通过将外源目的基因插入到已有的细菌或者病毒，以其作为载体构建重组BCG等疫苗。其中，将免疫基因Ag85b与ESTA-6融合构建融合基因，由此为结核病的预防提供改良的BCG，受到该研究领域的重视。这一研究思路来自这样的事实，即，免疫抗原ESAT-6和Ag85B形成的融合蛋白，以及基于该融合蛋白的结核病疫苗，可以有效诱导免疫应答[ii]。

  目前，免疫基因Ag85b与ESTA-6融合的研究工作已经取得了初步进展，北京大学蛋白质工程及植物遗传工程国家实验室H.Cai等[iii]对在佐剂二甲基二辛基癸基溴化铵（Dimethyldioctyldecyl  Ammonium  Bromide，DDA）作用下，编码了抗原基因Ag85B、MPT-83和  ESAT-6的质粒所诱导的保护性免疫效果进行了评价，指出IFN-γ等细胞因子得以增加，用DNA疫苗免疫的实验鼠，其肺部与脾脏的结核菌的生长受到抑制。国外同类研究[iv]也报道了ESAT-6—Ag85B融合蛋白的DNA疫苗（pE6/85）对实验鼠的免疫效果，即，在短期研究中，经过低剂量的抗原刺激之后28天，用pE6/85进行免疫，能够达到与分支杆菌Mycobacterium  bovis  BCG（卡介苗）同等的免疫效果，具有相似的肺部病理学和细菌感染特征。在存活实验中，由pE6/85免疫诱致的蛋白质与BCG免疫没有显著的差异，未接种、pE6/85和BCG对小鼠作用的平均死亡时间分别为102+/-20,  271+/-32  和  299+/-14（平均值＋/－方差）。此外，在BCG初次免疫后（BCG诱导的免疫蛋白水平降低时）再用pE6/85而非BCG或者用组合DNA疫苗进行强化免疫，能延长强肺部对结核菌的抵抗时间分别达15个月和18个月。

  此外，第四军医大学基础部微生物学教研室师长宏等在结核分支杆菌分泌蛋白Ag85b—ESTA-6的融合表达、纯化，及其免疫学分析等方面开展了一系列研究[v]、[vi]，初步的结论是，结核分枝杆菌的分泌蛋白Ag85B和ESAT-6被成功的融合表达，有望为结核病的预防提供有效的亚单位疫苗。

  综合地看，尽管免疫基因Ag85b与ESTA-6融合构建融合基因改良BCG尚在进一步探索中，但是已经取得重大的进展。而且更进一步的研究，如构建Ag85b—ESAT-6—IFNγ融合基因表达系统来转化BCG也在进行当中。可以肯定地说，人类将会找到免疫效果更好的BCG来应对结核病。