既生“瑜”何生“亮”

　　生物通报道：自12月底生物通推出中国年度产品评选活动以来，投票的读者越来越多，其中在PCR产物克隆产品中，Clontech的In-fusion和Invitrogen的Gateway+Topo可谓大家投票的焦点，最后谁能胜出呢？一时间真是难以定夺。

自99年作者第一次接触Gateway以来，Invitrogen公司凭借其强大的技术力量，对Gateway系统进行了不断的丰富和完善。从最初适用于原核表达目的载体，酵母表达，到后来的昆虫细胞，体外及病毒的表达系统。通过多年的努力把“一切皆有可能”发挥得淋漓尽致 一时间击败了包括Clontech的Creator等竞争对手，多个大型基因组研究项目先后签订了使用Gateway系统的协议。但也正是在这个时候Clontech的Infusion技术为PCR产物克隆揭开了新的一页。

以下是生物通分子生物学部技术专家对Gateway的点评，以及在Invitrogen中文网站上的文章

Invitrogen的Gateway技术：利用λ噬菌体位点特异重组系统的BP和LR双向反应，首先将PCR产物用传统方法克隆到Gateway化的入门载体，这个目标基因就可以迅速方便而且定向地重组到任何Gateway化的表达载体上。Topo技术是利用Topo异构酶，5分钟内快速高效地将PCR产物整合到Topo化的载体上，增加Topo技术的Gateway如虎添翼，彻底简化了PCR产物进入Gateway入门载体的步骤。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤。

优点：

*无需限制酶切、无需连接，只要利用重组酶就可以穿梭于任何 Gateway化的表达载体间，典型的克隆效率高达95％以上，保证正确的方向和阅读框。

*特别适合研究一个基因在不同表达系统中的表达。

*多个大型研究项目受益于Gateway技术，应用广泛。

*Invitrogen提供极为丰富多样的表达系统，为Gateway用户提供强有力的后盾。 

缺点：无论是Gateway还是Topo，封闭的系统仅适用于Invitrogen提供的表达载体，使得适用成本高。而且在启动子和目的基因间必需插入一段（好像是23个碱基）特定的噬菌体重组酶识别序列，对表达的影响不好估计。 

Infusion巧妙之处在于，无须任何繁琐的工作，就可以在30分钟内将你的PCR产物定向并框架精确地克隆到你需要的任何载体上。以下是生物通分子生物学部技术专家对Infusion的点评： 

Clontech的Infusion技术：合成引物时两端对应加入任意一种线性化载体两端15个碱基，PCR扩增目标基因后就可以利用重组酶直接将目标基因定向重组到任意指定表达载体上的指定位点。 

优点：

*开放的技术平台，任何质粒、任何目的基因都能适用。

*使得PCR产物克隆彻底摆脱了中间载体、重复亚克隆重复筛选的烦恼，一步到位，不受载体和酶切位点的限制，不用连接、补平、磷酸化，也不受PCR产物末端影响，而且速度快（30min），重组效率高达90%。

*在载体启动子和目的基因之间不会增加额外的碱基，真正精确定向克隆。

*Infusion试剂以冻干形式提供，可以在室温下保存和运输，不必担心运输过程中的温度问题。 

缺点：不适用于一对多的克隆，目的基因无法在不同载体间穿梭。针对每个载体均要合成特定的引物进行PCR。 

真正一步解决了所有的技术烦恼。

但马上又一个新的烦恼出来了

我们在做PCR产物克隆是该选择哪种产品呢？

无论是我们又或者是厂家，都只有感叹：既生瑜何生亮！

诚然，无论是没有In-fusion又或者是Gateway，另一种产品都将独步市场。