蜜蜂毒液蛋白酶序列被识别

　　

    [生物通讯]研究人员在近日于纽约举行的美国过敏、哮喘和免疫学学会会议上报道，他们识别出蜜蜂毒液蛋白酶的序列。这种已知与IgE 结合在一起的蛋白酶－－39KD过敏原，是第一个发现含有CUB域的过敏原，所谓CUB域就是指与蛋白质互作、宿主防御机制和先天免疫应答有关的区域。

    来自北卡罗来纳州东卡罗莱纳大学的病理学教授Donald Hoffman说，虽然很久以前就知道这个蛋白酶在过敏中起着重要作用，因为对蜜蜂毒液过敏病人的免疫印迹研究发现有这种蛋白酶的存在，但但它的序列很令人难以捉摸。“不同于大多数昆虫毒液中的过敏原－－这些过敏原以高浓度存在，已被广泛研究，蜜蜂的过敏原蛋白酶很难在不降解的前提下纯化。”Hoffman解释说。

    瑞士伯尔尼Ziglerspital公司的Ulrich Mueller说，他对识别出这个蛋白酶的序列感到十分兴奋。“我们十多年前就已在Western 印迹中发现39KD周围有一条带，”Mueller告诉BioMedNet 新闻的记者。“我们对蜜蜂毒液过敏的病人中，超过80％都有这条带，因此，显然这是一个十分重要的过敏原。”Mueller说，并表示他很希望能够看到这种蛋白酶的重组体形式。

    蜜蜂毒液蛋白酶是一种极难获得的过敏原，极易与其它过敏原发生交叉污染。而研究其重组体形式将会容易得多。Hoffman 声称，研制其重组体形式的工作正在进行中。

    Hoffman 和他的同事早先曾克隆出该蛋白酶一条245个氨基酸的序列。由此他们得知，这种蛋白酶属于胰蛋白酶类，底物缺口处有一蛋氨酸残基。

    为获得完整的cDNA，研究人员运用了一种称为5?RACE，即快速扩增cDNA末端（rapid amplification of cDNA ends）的技术。RACE利用反转录PCR技术来扩增 cDNA 未知的末端序列；这种技术对于克隆复杂的全长cDNA序列很有用。当分析蜜蜂毒液蛋白酶5’末端的序列时，他发现丝氨酸蛋白酶域出现N末端，包括一个由11个氨基酸组成的丝氨酸多肽序列。

    “我们在这种蛋白酶水解液中分离出与该区域对应的多肽。”Hoffman继续说。这个区域与含有106个氨基酸的CUB域相邻。

    CUB域由于对于发育调控十分重要，也广泛存在于其它蛋白中。（CUB这个名称源自含有它的3种蛋白质的首写字母。）CUB最存在于生殖蛋白酶如精子粘附素（spermadhesin）、发育蛋白酶如酸溶原胶原蛋白C蛋白酶、T细胞粘合和指导蛋白、吸诱素（attractin）、以及补体系统中的几种蛋白酶等中。

    蜜蜂毒液的蛋白酶与果蝇CG2280 基因的产物最为相似，该产物含有一个CUB域，几个多肽区和两个丝氨酸蛋白酶域。

    “其它毒液中的蛋白酶都出现令人惊异的分化，”Hoffman 说。“而蜜蜂毒液蛋白酶中CUB域的存在告诉我们这个过敏原与其它蛋白有关。”他补充说，“但我们不知道与之相关的蛋白究竟是什么。”

生物通摘译自BioMedNet