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HPV 52 在东南亚中低收入国家感染率高，威胁全球健康。研究人员用 pHIPZ4 质粒克隆优化的 HPV 52 L1 基因，在多形汉逊酵母（Hansenula polymorpha）中表达。结果显示，VLPs 诱导了小鼠体液免疫，可中和假病毒感染，有望成 HPV 疫苗新选择。
在全球健康领域，人乳头瘤病毒（HPV）感染一直是个不容忽视的大麻烦。HPV 感染是一种性传播疾病，更是宫颈癌的主要诱因。2020 年，全球约有 604,127 例宫颈癌病例，341,831 人因此失去生命。HPV 就像个 “狡猾的敌人”，盯上了 80% 的性活跃人群，尤其是中低收入国家，这些国家承受着全球约 86% 的宫颈癌负担。虽然 HPV 疫苗是预防宫颈癌的有效手段，但高昂的成本却让很多人望而却步，哪怕在发达国家，HPV 疫苗的接种率也不高。
HPV 家族十分庞大，目前已发现超 200 种类型，依据致癌潜力分为高危和低危型。其中，高危型的 HPV 16、18 等多种类型常出现在宫颈癌病例中。而 HPV 52 在东南亚地区尤为猖獗，在印度尼西亚的感染率更是高达 23.2%。市面上现有的 HPV 预防性疫苗中，只有 Gardasil 9 能预防 HPV 52 感染，开发更实惠的 HPV 疫苗迫在眉睫。
基于此，印度尼西亚国家研究和创新署（BRIN）的研究人员开展了一项极具意义的研究。他们致力于评估由 HPV 52 L1 病毒样颗粒（VLPs）制备的预防性疫苗候选物的免疫原性。最终研究发现，利用多形汉逊酵母（Hansenula polymorpha）表达系统生产的 HPV 52 L1 VLPs 能够诱导免疫反应，这一成果为 HPV 疫苗的开发开辟了新方向，若进一步研究成熟，有望成为更经济有效的 HPV 疫苗选择，对全球宫颈癌预防工作意义重大，该研究成果发表在《Biologicals》上。
研究人员在研究过程中用到了几个关键技术方法。首先是基因克隆技术，他们从 NCBI 数据库获取 HPV 52 L1 序列，进行密码子优化后，将其克隆到 pHIPZ4 质粒中。蛋白质纯化则采用一步阳离子交换色谱法，以此获取高纯度的目标蛋白。免疫原性检测方面，运用了酶联免疫吸附测定（ELISA）分析小鼠血清，还通过绿色荧光蛋白（GFP）假病毒中和试验来评估免疫效果。
下面来详细看看研究结果。
质粒构建和转化：研究人员从 NCBI 数据库获取与印度尼西亚分离株相似度达 99% 的 HPV 52 L1 序列，经密码子优化后合成 pD902-HPV52L1 质粒。通过 PCR 扩增目的基因，并成功将 HPV 52 L1 N 端截短基因连接到 pHIPZ4 质粒的多克隆位点，构建出 7340bp 的质粒。经菌落 PCR 验证，得到约 1512bp 的条带，为后续研究奠定基础。
蛋白纯化与 VLP 形成验证：利用一步阳离子交换色谱法对表达的蛋白进行纯化，经 SDS-PAGE 和 Western blot 确认纯化效果。透射电子显微镜（TEM）观察显示，纯化的 HPV 52 L1 蛋白成功组装成 VLPs，回收率达 51.76%。
免疫原性研究：用含 AlPO4佐剂的 VLPs 疫苗免疫 BALB/c 小鼠，ELISA 分析小鼠血清发现，L1 抗原诱导产生了高抗体滴度，表明疫苗制剂在小鼠模型中引发了体液免疫反应。GFP 假病毒中和试验进一步证实，小鼠血清中的抗体能够中和 HPV 52 假病毒对人胚肾 293（HEK293）细胞的感染。
综合研究结论和讨论部分，从多形汉逊酵母表达系统中纯化得到的 N 端截短的 HPV 52 L1 重组蛋白来源的 VLPs 具有免疫原性，不仅能诱导体液免疫反应，还能产生特异性中和抗体。而且，一步阳离子交换色谱纯化法成本低、操作简单且可靠。这项研究为表达 HPV 52 L1 主要衣壳蛋白提供了新的构建方案，为开发更经济有效的 HPV 疫苗带来了希望，在宫颈癌预防领域具有重要的理论和实践意义，为后续相关研究和疫苗研发开辟了新道路，有望推动全球宫颈癌防控工作取得新进展。
