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伪狂犬病病毒（PRV）感染动物后潜伏，应激刺激易激活病毒，危害养猪业。西南大学研究人员以 PC-12 细胞为模型，研究姜黄素（Cur）对 PRV 激活的影响。发现 Cur 可阻止地塞米松（DEX）激活 PRV，且 miR-155-5p/Aak1-Numb/Notch2 轴介导该过程，为 PRV 防控提供新方向。
在养猪的世界里，有一种隐藏的 “杀手” 时刻威胁着猪群的健康，它就是伪狂犬病病毒（PRV）。PRV 感染猪后，会潜伏在神经元中，看似风平浪静，但一旦猪受到运输、噪音、高温等应激刺激，体内的糖皮质激素水平上升，就如同给这只 “沉睡的野兽” 注入了兴奋剂，PRV 会被激活，引发伪狂犬病，导致猪出现神经系统紊乱和器官损伤，给养猪业带来严重的经济损失。
此前研究虽发现姜黄素（Cur）对一些病毒有抑制作用，比如能维持爱泼斯坦 - 巴尔病毒（EBV）的抑制状态，但它能否阻止应激激素激活 PRV 还是个未知数。为了解开这个谜团，来自西南大学动物医学院的研究人员踏上了探索之旅，他们的研究成果发表在了《Veterinary Research》杂志上。
研究人员开展的这项研究，就像是一场寻找 “解药” 的冒险。他们以高度分化的 PC-12 细胞和 PK-15 细胞为实验对象，通过一系列精心设计的实验，试图弄清楚 Cur 对 PRV 激活的影响以及其中的分子机制。
研究人员运用了多种关键技术方法。在细胞实验方面，进行了细胞培养，将 PC-12 和 PK-15 细胞在特定培养基中培养。采用转染技术，把 miR-155-5p 模拟物、抑制剂、Aak1 过表达载体（Aak1-OE）和短发夹 RNA（shRNA）转入 PC-12 细胞。还利用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测蛋白水平，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测基因表达水平，空斑实验检测病毒滴度等。
下面来看看具体的研究结果：
- DEX 激活 PC-12 细胞中的 PRV：研究人员用感染复数（MOI）为 1 的 PRV 感染 PC-12 细胞 24 小时后，再用 0.5 μM 地塞米松（DEX）处理 4 小时。结果发现，与对照组相比，PRV + DEX 组细胞活力和线粒体膜电位（MMP）显著下降，活性氧（ROS）含量增加，病毒基因拷贝数、病毒释放量和病毒蛋白水平也显著上升。这表明 PRV 感染 PC-12 细胞 24 小时后活性被抑制，而 DEX 处理会打破这种抑制状态，激活 PRV。
- miR-155-5p 通过靶向调控 Aak1 基因参与抑制 PRV 的维持和破坏：通过 RNA 测序（RNA-Seq）筛选差异表达的微小 RNA（miRNA），发现与对照组相比，PRV 组中 miR-155-5p 水平上调，PRV + DEX 组中下调。预测其靶基因并验证后，发现 miR-155-5p 直接调控 Aak1 基因表达，二者呈负相关。双荧光素酶报告基因实验进一步证实了这种直接调控关系。
- miR-155-5p-Aak1 在抑制 PRV 的维持和破坏中的中介作用：构建 Aak1 过表达载体和干扰质粒，转染 PC-12 细胞。结果显示，在 PRV 组中，转染 miR-155-5p 抑制剂或 Aak1 过表达质粒，会降低细胞活力和 MMP，增加 ROS 水平和病毒基因复制；在 PRV + DEX 组中，转染 miR-155-5p 模拟物或 Aak1 干扰质粒，则出现相反效果。这说明 miR-155-5p-Aak1 参与了抑制 PRV 的维持和破坏过程。
- miR-155-5p-Aak1 下游调控分子在抑制 PRV 维持和破坏过程中的作用：通过蛋白质免疫印迹法检测发现，在 PRV 组中转染 miR-155-5p 抑制剂，Aak1 和 Notch2 蛋白水平上调，Numb 蛋白水平下调；在 PRV + DEX 组中转染 miR-155-5p 模拟物，结果相反。转染 Aak1 过表达或干扰质粒也有类似规律。这表明 miR-155-5p-Aak1 通过调节 Numb 和 Notch2 表达介导 DEX 诱导的 PRV 激活。
- 姜黄素阻止 DEX 诱导的 PRV 激活：用不同浓度 Cur 处理 PC-12 细胞，发现 5 μM 和 10 μM Cur 对细胞无毒性。与 PRV + DEX 组相比，PRV + Cur5 + DEX 和 PRV + Cur10 + DEX 组细胞活力增加，MMP 水平下降，ROS 含量升高，病毒基因拷贝数降低，且 10 μM Cur 效果更明显。RT-qPCR 分析表明，Cur 调节 miR-155-5p 和 Aak1 mRNA 水平，暗示 miR-155-5p-Aak1 介导了 Cur 阻止 DEX 激活 PRV 的过程。
- miR-155-5p-Aak1-Numb/Notch2 通路介导 Cur 阻止 DEX 激活 PRV 的作用：在 PRV 感染的细胞中加入 miR-155-5p 抑制剂、Cur，再用 DEX 处理，检测相关蛋白水平。结果显示，与 PRV 组相比，PRV + DEX 组 Aak1 和 Notch2 蛋白水平升高，Numb 蛋白水平降低；与 PRV + DEX 组相比，PRV + Cur + DEX 组则相反。这表明 Cur 通过上调 miR-155-5p 水平，抑制 Aak1 表达，增加 Numb 和 Notch2 表达，阻止 DEX 激活 PRV，即 miR-155-5p-Aak1-Numb/Notch2 轴介导了这一过程。
综合研究结果和讨论部分，这项研究意义重大。它首次揭示了 Cur 通过 miR-155-5p-Aak1-Numb/Notch2 通路阻止 DEX 诱导的 PRV 激活，为理解糖皮质激素诱导 PRV 激活的机制提供了新视角，也为 Cur 在预防 PRV 激活方面的临床应用奠定了基础。不过，研究也存在一些局限性，比如 Numb 在 Cur 预防 DEX 激活 PRV 过程中对 Notch 的负调控作用还需进一步研究，DEX 处理后调节 miR-155-5p 表达的上游调控因子也有待探索，且研究结果还需在体内实验中进一步验证。但无论如何，这项研究为对抗伪狂犬病病毒提供了新的思路和潜在的治疗方法，有望在未来帮助养猪业减少因 PRV 感染带来的损失。
