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本文发现了一种新的长链非编码 RNA（lncRNA）DARVR，它通过 lnc - DARVR/miR - 365 - 1 - 5p/LAMB1 轴，经补体 C3 途径抑制轮状病毒（RV）复制，揭示了 lncRNA 在病毒 - 宿主互作中的关键作用，为抗病毒药物研发提供新方向。
引言
长链非编码 RNA（lncRNA）是一类长度超 200 核苷酸、无法翻译为蛋白质的 RNA 分子。起初被视为遗传噪音，后研究发现其在多种生物过程中意义重大，在宿主与病毒的相互作用中，既能协助病毒增殖，如水泡性口炎病毒（VSV）劫持宿主 lncRNA ACOD1 和 AANCR 促进感染 ，丙型肝炎病毒（HCV）借助 lncRNA HULC 释放病毒颗粒；也能保护宿主抵抗病毒感染，像 lnc - zc3h7a 促进抗病毒反应 ，lnc - TALC 增强抗病毒效果。已有研究表明某些 lncRNA 参与轮状病毒（RV）感染，但 RV 感染时补体系统与 lncRNA 的相互作用仍不明确。
补体级联反应（补体系统）是固有免疫系统的重要部分，可辅助抗体清除病原体、促进炎症反应，其激活途径有经典、替代和凝集素途径，核心事件是 C3 转化为 C3b 和 C3a，不过病原体常针对 C3 实施免疫逃避策略。LAMB1 是层粘连蛋白家族成员，参与多种生物过程，有研究显示它参与炎症和补体级联反应，但 LAMB1 与 C3 的直接关系缺乏可靠证据。近年来发现多种 RNA 分子可竞争结合 miRNA，调节 mRNA 活性，这种竞争内源性 RNA（ceRNA）机制广泛存在。研究人员通过转录组测序发现一种新的未注释 lncRNA，命名为 DARVR，后续研究揭示了其在 RV 感染中的调控机制。
材料和方法
实验选用 MA104 细胞和 Vero 细胞，在添加 8% 胎牛血清的杜氏改良 Eagle 培养基（DMEM）中，于 37°C、5% CO2条件下培养，使用多种不同毒株的 RV 进行刺激实验。构建包含 DARVR 序列的质粒和 LAMB1 3′ UTR 相关质粒，用于后续实验。对感染或未感染 RV 的 MA104 细胞进行 RNA 测序（RNA - seq）。运用 RNA 荧光原位杂交（RNA FISH）和免疫荧光实验检测相关分子表达和定位。提取细胞 RNA 进行逆转录聚合酶链式反应（RT - PCR），检测病毒和相关基因表达。设计针对 lncRNA DARVR、LAMB1 和 C3 的小干扰 RNA（siRNA）进行 RNA 干扰实验。利用脂质体转染试剂 Lipofectamine 3000 进行 DNA 和 RNA 转染。采用双荧光素酶报告基因检测实验验证分子间相互作用。通过蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测蛋白质表达。运用 RNA 下拉实验和免疫共沉淀实验（Co - IP）探究分子结合和相互作用。建立乳鼠腹泻模型进行动物实验。运用统计学方法分析实验数据。
结果
RNA - seq 发现 RV 感染后下调的新 lncRNA DARVR，它是位于 10 号染色体的基因间 lncRNA，编码潜力低，部分在 RV 感染时从细胞核迁移到细胞质。RV 感染 MA104 细胞后，DARVR 在 16 小时后显著下调，且不同毒株、不同感染复数（MOI）对其下调程度有影响，在乳鼠体内，RV 感染导致其在肠道、肝脏和脾脏中下调。过表达 DARVR 抑制 RV 复制，抑制 DARVR 则促进 RV 复制。预测并证实 DARVR 可与 miR - 365 - 1 - 5p 结合，RV 感染后 DARVR 从细胞核转出与 miR - 365 - 1 - 5p 结合。转染 miR - 365 - 1 - 5p 模拟物抑制 DARVR 表达并促进 RV 复制，转染抑制剂则相反。RNA - seq 显示 LAMB1 是 DARVR 的共表达基因，miR - 365 - 1 - 5p 可抑制 LAMB1 表达，抑制 LAMB1 促进 RV 复制。RV 感染后 LAMB1 和 C3 表达上调且直接相互作用，抑制 LAMB1 降低 C3 表达，抑制 C3 促进 RV 复制，DARVR 可缓解 miR - 365 - 1 - 5p 对 C3 的抑制作用。
讨论
研究发现新 lncRNA DARVR 在 RV 感染中起抗病毒作用，它与 miR - 365 - 1 - 5p、LAMB1 通过 ceRNA 机制形成调控环，调节补体因子 C3 表达，但 LAMB1 与 C3 相互作用机制不明。miR - 365 - 1 - 5p 对 LAMB1 的调控可能存在其他途径，且其在低 MOI RV 感染中的作用需进一步研究。LAMB1 在补体系统中的作用研究较少，其促进 C3 表达的机制以及 C3 在无 LAMB1 时的活性都有待探索。补体系统在病毒感染中的作用复杂，LAMB1 与 C3 直接相互作用的机制尚不清楚。未来对 DARVR 缺陷细胞的研究，有助于深入了解 C3 与 RV 的相互作用，以及该调控机制对其他病毒的影响也需进一步探究。
结论
研究鉴定出 lncRNA DARVR，它在 RV 感染时吸附 miR - 365 - 1 - 5p，减轻对 LAMB1 的抑制，补体因子 C3 需 LAMB1 发挥抗 RV 复制作用。该研究增进了对 lncRNA 抗病毒功能的理解，为设计抗病毒药物提供了新方向。
