棘阿米巴角膜炎诊断新靶点：四种包囊壁蛋白与滋养体甘露糖结合域的高效检测

本文推荐一种基于四种棘阿米巴包囊壁蛋白（Jonah-1、laccase-1、Luke-2、Leo-A）和滋养体甘露糖结合域（ManBD）的抗体诊断策略，通过免疫荧光和ELISA技术高效检测临床样本中的病原体。研究证实，兔多抗（rAbs）对11株棘阿米巴（含6种致角膜炎T4基因型）的包囊和滋养体检测率超95%，且laccase-1在成囊过程中分泌至培养基，为开发快速诊断工具奠定基础。

　　ABSTRACT
自由生活的棘阿米巴（Acanthamoebae）可引发角膜炎症（角膜炎），若未及时诊断治疗会导致失明。其包囊壁含纤维素双层结构，传统诊断依赖共聚焦显微镜或角膜刮片染色，技术要求高；滋养体则需培养鉴定，延误治疗。本研究通过结构分析与实验验证，筛选出包囊壁四种关键蛋白（Jonah-1、laccase-1、Luke-2、Leo-A）及滋养体甘露糖结合蛋白（AcMBP-1）的甘露糖结合域（ManBD）作为诊断靶点。

INTRODUCTION
棘阿米巴角膜炎（AK）在资源匮乏地区因农业外伤或水源接触高发，而在欧美多与隐形眼镜使用相关。T4基因型（如A. castellanii Neff株）为主要致病株。滋养体通过AcMBP-1粘附角膜细胞，分泌蛋白酶致溃疡；包囊则抵抗消毒剂，增加治疗难度。现有诊断技术（如共聚焦显微镜或CFW染色）依赖经验，易与真菌或植物细胞混淆。

RESULTS

1. 靶点筛选与抗体验证

   • 包囊壁蛋白：Jonah-1（β-螺旋折叠）、Luke-2（β-果冻卷折叠）、Leo-A（四对二硫键结构）及laccase-1（铜氧化酶域）通过AlphaFold预测结构，兔抗（rAbs）证实其定位与GFP标记蛋白一致。
   • ManBD鉴定：AcMBP-1的ABS域（DUF4114）经实验证实结合甘露糖树脂和人角膜上皮细胞（HCLE），命名为ManBD。

2. 高效检测性能

   • 包囊检测：rAbs对10/11株棘阿米巴（含T4型）CFW标记包囊的检测率>95%，常规荧光显微镜即可观察。Laccase-1在成囊期分泌至培养基，ELISA可检测。
   • 滋养体检测：抗ManBD rAbs识别所有11株DAPI标记滋养体，定位表面。

3. 动态表达与模型

   • “渗漏-密封”模型：早期表达的Jonah-1和laccase-1部分滞留包囊外层，其余分泌；晚期表达的Luke-2和Leo-A则固定于内层。

DISCUSSION
研究首次系统评估四种包囊壁蛋白及ManBD的诊断潜力，为开发快速免疫检测或侧流层析技术提供依据。局限性包括未测试临床样本及单抗转化需求。未来需扩大菌株验证并探索低密度检测限。

创新点

• 结构指导的靶点筛选与抗体开发
• 包囊与滋养体双靶标诊断策略
• 分泌型laccase-1的ELISA检测潜力

应用前景
该成果有望弥补现有AK诊断技术不足，尤其适用于资源有限地区，推动精准医疗发展。