Bcor 缺失促进慢性淋巴细胞白血病向 Richter 转化：机制探索与治疗新希望

《Leukemia》：Bcor loss promotes Richter transformation of chronic lymphocytic leukemia associated with Notch1 activation in mice

　　

研究背景：攻克白血病转化难题的探索之旅

在血液疾病的世界里，慢性淋巴细胞白血病（Chronic Lymphocytic Leukemia，CLL）是一种常见的恶性肿瘤。近年来，随着医学技术的进步，CLL 患者的治疗取得了一定进展，但当 CLL 发生 Richter 转化（Richter Transformation，RT）时，情况就变得棘手起来。RT 是 CLL 进展过程中出现的一种侵袭性淋巴瘤，预后极差。尽管基因测序技术让我们对 CLL 和 RT 的基因架构有了一定了解，发现了如 BCL6 共抑制因子（BCOR）突变与 NOTCH1 异常等相关特征，但 RT 的发病机制依旧迷雾重重，这也导致针对 RT 的治疗手段极为有限。因此，深入探究 RT 的发病机制，寻找有效的治疗靶点，成为了医学领域亟待解决的重要问题。

为了揭开 RT 发病机制的神秘面纱，来自意大利佩鲁贾大学、圣拉斐尔医院等机构的研究人员展开了一项重要研究，相关成果发表在《Leukemia》杂志上。

研究方法：多技术联合的探索利器

研究人员采用了多种关键技术来开展研究。在小鼠模型构建方面，通过将携带特定基因的小鼠进行杂交，如将Bcorlox/lox小鼠与 CD19 - Cre 小鼠、Eμ - TCL1 小鼠杂交，获得了 Bcor 基因缺失且带有白血病特征的小鼠模型。利用免疫表型分析技术，通过流式细胞术对小鼠外周血、骨髓、脾脏和肝脏中的细胞进行检测，分析 B 细胞和 T 细胞亚群的变化。免疫印迹分析则用于检测 Notch1、Hes1 和 Myc 等蛋白的表达水平。PCR 技术被用于验证 Bcor 基因位点的 Cre 介导切除事件、检测 Bcor 转录本的缺失以及分析肿瘤细胞的克隆性。转录组分析通过 RNA 测序（RNA - Seq），对小鼠脾脏分选的 B 细胞进行转录水平的研究，挖掘基因表达变化和相关信号通路。

研究结果：关键发现点亮治疗新方向

1. Bcor 缺失对 B 细胞分化的影响：研究人员通过实验发现，Bcor 缺失的小鼠，其脾脏和骨髓中的 B 细胞数量和分布出现异常，如总 B220⁺细胞减少，滤泡（Fo）B 细胞减少，边缘区（MZ）B 细胞增多。但在 18 个月的观察期内，这些小鼠并未出现淋巴系统恶性肿瘤的迹象，表明 Bcor 缺失本身不足以驱动小鼠发生淋巴系统恶性肿瘤。

2. Bcor 缺失促进 Eμ - TCL1 白血病向高级别淋巴瘤转化：当 Bcor 缺失的小鼠与 Eμ - TCL1 小鼠杂交后，情况发生了变化。Bcor?1;TCL1 小鼠的外周血、脾脏和骨髓中，CD19⁺ CD5⁺ B 细胞数量显著增加，且呈现单克隆性。这些小鼠出现脾肿大，脾脏组织被中等大小到大型的细胞浸润，细胞形态与 TCL1 小鼠的小 B 淋巴细胞不同，生存期也明显缩短，表现出类似人类 RT 的特征。

3. 转录组特征揭示分子机制：对Bcor?1;TCL1 小鼠脾脏 B 细胞进行 RNA - Seq 分析发现，其基因表达谱出现显著变化。与细胞增殖、细胞周期进展相关的基因如周期蛋白（Ccnd2、Ccnb1、Ccnd3）和周期蛋白依赖性激酶（Cdk1、Cdk6）上调，而周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Cdkn1a、Cdkn2b）下调；同时，致癌和代谢过程相关基因上调，免疫相关通路如氧化磷酸化（OXPHOS）和 DNA 损伤修复（DDR）过程相关基因下调。这表明Bcor?1;TCL1 小鼠在转录水平上模拟了人类 RT 的特征。

4. 肿瘤微环境和 T 细胞功能异常：分析Bcor?1;TCL1 小鼠的肿瘤微环境发现，恶性细胞上调了 Ccl17 和 Ccl22 趋化因子，吸引调节性 T（Treg）细胞和 Th2 细胞，同时与肿瘤 B 细胞生长相关的基因如 Il6ra、Cx3cl1 和 Tgfbr1 也出现过表达；而参与适应性免疫系统和调节 BCR 激活的基因 H2 - Q2 和 Lair1 则下调。进一步研究发现，Bcor?1;TCL1 小鼠骨髓中的 CD4⁺、CD4⁺ CD25⁺和 CD8⁺细胞数量增加，且这些细胞中 PD - 1 的表达显著升高，提示 T 细胞功能受损，与 RT 表型相关。

5. Notch1 信号通路激活及抑制效果：研究发现，Bcor?1;TCL1 小鼠肿瘤 B 细胞中 Notch1 信号通路被激活，Notch1 mRNA 及其下游靶基因 Hes1 和 Myc 的表达水平显著升高，Notch1 蛋白的活性片段 NICD 也明显增加。使用抗 Notch1 分子贝普利地（bepridil）对 RT 小鼠进行治疗后，外周血中 CD19⁺ CD5⁺细胞数量逐渐减少，脾脏大小减小，肿瘤细胞浸润减少，NICD 及其下游靶蛋白 Myc 和 Hes1 的表达降低，同时 CD4⁺ PD - 1⁺和 CD4⁺ CD25⁺ PD - 1⁺细胞的频率也受到负调控，表明抑制 Notch1 对 RT 表型有显著影响。

研究结论与意义：开启 RT 治疗新篇章

综合以上研究结果，该研究首次证实了 Bcor 的肿瘤抑制作用以及其与 Notch1 信号通路在高级别淋巴瘤发生发展中的相互作用。研究构建的Bcor?1;TCL1 小鼠模型高度模拟了人类 RT 的特征，为研究 RT 的发病机制提供了重要工具。通过对该模型的研究，发现了一系列与 RT 相关的分子变化和信号通路，如细胞周期调节、代谢过程改变、免疫微环境失衡以及 Notch1 信号通路的激活等，这些发现为深入理解 RT 的发病机制提供了新的视角。

此外，针对 Notch1 信号通路的抑制实验表明，抑制 Notch1 不仅可以影响肿瘤细胞的增殖和存活，还能调节肿瘤微环境中的免疫细胞功能，提示 Notch1 可能是 RT 治疗的潜在靶点。这一研究成果为开发针对 RT 的新疗法提供了理论依据和实验基础，有望为 RT 患者带来新的治疗希望。相信在未来，基于这些研究发现，会有更多针对 RT 的精准治疗策略出现，改善患者的预后。