CutIn 构建体：助力稳定细胞系生成的新利器，为新兴感染研究开辟新道路

《Functional & Integrative Genomics》：CutIn: a ready-to-use construct for rapid generation of urgently needed transgenic cell lines in emerging infection research

为解决稳定细胞系生成难题，研究人员开展 CutIn 构建体研究，成功实现外源基因敲入，意义重大。

　　定点外源基因敲入以生成稳定细胞系，这是一个多步骤的过程，并且严重依赖专业技术。因此，人们急需一种有效且易于操作的方法，尤其是在对细胞系有迫切需求的情况下，比如新兴感染研究领域。在此，研究人员提出了一种名为 CutIn 的通用构建体，它能够表达 Cas9 蛋白以及双导向 sgRNA，这两种 sgRNA 分别靶向宿主细胞基因组位点和市售共转染供体质粒的氨苄青霉素抗性（AmpR）基因。该构建体可以特异性地诱导共转染质粒和宿主细胞基因组产生双链断裂（DSBs），进而通过非同源末端连接（NHEJ）修复机制促进整个质粒的整合。作为初步测试，研究人员选择了腺相关病毒整合位点 1（AAVS1）或次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRT）位点作为宿主基因组靶点，并使用了常用的人类细胞系 293T、HeLa 和 HCT116。在这三种细胞系中，研究人员都利用 CutIn 进行了报告质粒敲入实验，AAVS1和AmpR位点，以及HPRT和AmpR位点都被有效靶向。通过 CutIn 介导的全表达载体整合，研究人员快速获得了荧光蛋白、人类血管紧张素转换酶 2（ACE2）和登革热病毒（DENV）感染报告转基因细胞。这种方法操作简便，在支持新兴 / 再现性传染病研究方面具有潜力。不过，要全面评估其适用性和有效性，还需要在不同的研究背景下进一步验证。