原发性醛固酮增多症中 miR-24-3p/Top1 通路与心血管疾病风险的关联研究

本文揭示原发性醛固酮增多症（PA）患者肾周脂肪中 miR-24-3p 上调，或通过靶向 Top1 增加心血管疾病（CVD）风险。

　　

原发性醛固酮增多症与心血管疾病风险的关联探索

原发性醛固酮增多症（PA）是继发性高血压的常见病因，以高血压、血浆肾素活性受抑制和醛固酮分泌过多为主要特征。与原发性高血压患者相比，PA 患者心血管疾病（CVD）和代谢综合征的发生率更高。目前，PA 患者 CVD 高风险的机制尚未完全明确，而肾周脂肪在其中的作用逐渐受到关注。肾周脂肪作为一种特殊的内脏脂肪，含有独特的白色和棕色脂肪细胞，能分泌多种脂肪因子和细胞因子，对能量代谢和心血管功能有重要影响。微小核糖核酸（miRNA）作为基因表达的重要调节因子，在多种疾病的发生发展中发挥关键作用。本研究聚焦于 PA 患者肾周脂肪中差异表达的 miR-24-3p，旨在探究其在循环炎症及 CVD 高风险中的作用机制。

研究方法与实验设计

研究选取了 18 - 65 岁的患者，分为对照组（n = 16，行腹腔镜手术治疗非肾上腺疾病）、PA 无 CVD 组（n = 24）和 PA 合并 CVD 组（n = 40）。PA 的诊断依据盐水输注试验后血浆醛固酮浓度（PAC）＞10 ng/dL 和 / 或卡托普利激发试验后 PAC 下降≤30%。研究采集患者肾周脂肪、静脉血，测量肾周脂肪厚度（PRFT）。同时，进行细胞实验，培养小鼠 3T3-L1 前脂肪细胞、棕色前脂肪细胞（WT-1）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC），转染 miR-24-3p 模拟物、抑制剂或相关质粒，用醛固酮处理细胞，并建立脂肪细胞与 HUVEC 的单向共培养模型。实验采用多种检测方法，包括 RNA 提取、逆转录、定量 PCR（qPCR）、蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析、酶联免疫吸附测定（ELISA）、还原型谷胱甘肽（GSH）水平检测、活性氧（ROS）检测、油红 O 染色、双荧光素酶报告基因检测等，以探究相关分子机制。

研究结果解读

1. 患者临床特征差异：PA 合并 CVD 组患者高血压病程最长、病情最严重，低钾血症最明显，主动脉粥样硬化患病率最高，血清钾、磷水平最低，钠水平最高。心脏超声显示，三组患者室间隔和左心室后壁舒张末期厚度逐渐增加。
2. miR-24-3p 表达及临床相关性：PA 患者肾周脂肪中 miR-24-3p 表达显著上调，且在 PA 合并 CVD 组中上调更明显。其表达与 PAC、左心室后壁舒张末期厚度、BMI 呈正相关，与 PaO₂呈负相关，还与 PRFT 显著正相关。将 PA 患者按 miR-24-3p 水平分为高低两组，高表达组患者多项临床指标与低表达组存在显著差异，提示 miR-24-3p 与 PA 患者的代谢和心血管状态密切相关。
3. 肾周脂肪及血清特征变化：PA 患者肾周脂肪中脂肪生成相关基因（如 C/EBPα、PGC1α、UCP1）、氧化应激相关基因（如 NRF2、HO-1、NOX4）和炎症相关基因（IL-6）表达均升高，蛋白质水平分析也证实了脂肪生成、炎症和氧化应激的增强。PA 合并 CVD 组肾周脂肪的氧化应激水平高于 PA 无 CVD 组。血清检测发现，单侧 APA 患者患侧肾上腺静脉 IL-6 水平显著高于健侧和外周血，GSH 水平则更低，且 PA 合并 CVD 组外周血 IL-6 水平更高。
4. miR-24-3p 和醛固酮对脂肪细胞的影响：在 3T3-L1 和 WT-1 细胞分化过程中，miR-24-3p 表达逐渐增加。过表达 miR-24-3p 促进 3T3-L1 细胞脂肪生成，抑制则减少脂肪生成。醛固酮刺激可上调 miR-24-3p 表达，且促进脂肪细胞的脂肪生成、炎症和氧化应激反应。
5. 综合作用及对 HUVEC 的影响：在白色和棕色脂肪细胞中，miR-24-3p 过表达促进脂肪生成，抑制则减轻脂肪生成和炎症。抑制 miR-24-3p 可缓解醛固酮诱导的脂肪细胞氧化应激增加。共培养实验表明，脂肪细胞在醛固酮和 miR-24-3p 干预下，其条件培养基（CM）对 HUVEC 的影响不同。醛固酮和 miR-24-3p 抑制剂 NC 处理的脂肪细胞 CM 可使 HUVEC 的黏附、炎症、氧化应激和衰老相关指标上调，而醛固酮和 miR-24-3p 抑制剂处理的脂肪细胞 CM 则可改善这些表型。
6. Top1 作为 miR-24-3p 靶基因的验证：通过数据库分析和实验验证，确定 Top1 是 miR-24-3p 的靶基因。miR-24-3p 模拟物转染脂肪细胞后，Top1 蛋白水平显著下调，抑制剂则使其上调。双荧光素酶报告基因实验证实 miR-24-3p 可直接结合 Top1 的 3'-UTR 并发挥抑制作用。
7. miR-24-3p 和 Top1 调节对脂肪细胞及 HUVEC 的影响：脂肪细胞共转染 miR-24-3p 模拟物和 Top1 过表达质粒实验表明，上调 Top1 可部分逆转 miR-24-3p 模拟物对脂肪细胞的影响，减少脂肪生成、炎症和氧化应激。Top1 抑制剂处理脂肪细胞后，炎症、氧化应激和凋亡相关基因表达上调，IL-6 分泌增加，其 CM 处理的 HUVEC 黏附、炎症和氧化应激相关指标也显著升高。

研究结论与展望

本研究表明，PA 患者肾周脂肪中 miR-24-3p 表达上调，通过靶向 Top1 诱导脂肪生成、炎症和氧化应激，可能导致血管内皮损伤，进而增加 CVD 风险。肾周脂肪可能是循环炎症的来源，加剧内皮损伤，与 PA 患者的 CVD 高风险密切相关。然而，本研究存在一定局限性。肾周脂肪与肾上腺静脉血的关系复杂，肾上腺静脉血来源多样，可能影响研究结果的准确性。实验主要关注脂肪细胞和内皮细胞，未涉及心肌细胞和心脏成纤维细胞，且未在肾上腺皮质细胞中验证相关作用。此外，缺乏动物实验，无法全面模拟体内复杂环境。未来研究可进一步拓展细胞模型，开展动物实验，深入探究 PA 患者 CVD 高风险的机制，为临床治疗提供更有效的靶点和策略。