宁夏发现携带 blaNDM-1和 blaSHV-12的高毒力碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌，敲响临床防控警钟

研究人员分析肺炎克雷伯菌 KP114 的耐药、毒力及遗传特征，发现其高毒耐药且可传播，对临床防控意义重大。

　　近年来，肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）成为医院感染的重要病原菌，它就像一个隐藏在暗处的 “超级病菌”，不断进化，出现了多药耐药和高毒力的菌株，严重威胁着人们的健康。其中，一些特定基因的 KP 菌株，如血清型 K1/K2，进化成了高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKP）。hvKP 最初在台湾被发现，能在年轻健康人群中引发严重的社区获得性感染。与此同时，KP 对碳青霉烯类抗生素（治疗感染的最后一道防线）的耐药性也在不断上升，出现了碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）。更糟糕的是，近年来还出现了兼具碳青霉烯耐药和高毒力的菌株，即碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-hvKP），这类菌株导致的感染难以治疗，患者预后较差，而宁夏回族自治区关于 CR-hvKP 菌株的报道还很罕见。

为了深入了解这类危险菌株，宁夏医科大学总医院的研究人员开展了一项研究。他们从一名患者的痰液中分离出一株携带 bla_NDM-1和 bla_SHV-12的 ST65 K2 血清型肺炎克雷伯菌（KP114），并对其耐药表型、毒力表型和遗传特征进行了全面分析。该研究成果发表在《Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials》上。

研究人员主要采用了以下关键技术方法：首先，利用 VITEK 2 Compact 系统进行抗生素敏感性测试，判断菌株对不同抗生素的耐药情况；其次，通过 PCR 和 Sanger 测序检测多位点序列分型（Multilocus Sequence typing，MLST）、耐药基因和毒力基因；然后，借助小鼠感染模型、血清抗性试验、巨噬细胞吞噬试验评估菌株毒力；最后，运用全基因组测序技术获取菌株详细的遗传信息，并进行接合实验探究抗性和毒力特征的传递性。

研究结果如下：

1. 菌株耐药与毒力特征：KP114 对所有测试的 β - 内酰胺类抗生素耐药，但对阿米卡星、妥布霉素等敏感。通过拉丝试验发现，KP114 产生的粘性丝直径大于 5mm，表明其具有高粘液表型。MLST 分析显示该菌株属于序列型 65，血清型为 K2。进一步检测发现，它携带 bla_NDM-1碳青霉烯酶基因、bla_SHV-12β - 内酰胺酶基因以及多个高毒力标记基因，属于 CR-hvKP。
2. 体内外毒力验证：在小鼠感染实验中，感染 KP114 的小鼠与感染知名高毒力菌株 NTUH-K2044 的小鼠一样，在 24 小时后存活率为 0%，而感染临床 CRKP 菌株 KP26（作为阴性对照）的小鼠存活率为 90%，这表明 KP114 在小鼠感染模型中表现出高毒力。在血清抗性试验和巨噬细胞吞噬试验中，KP114 也展现出较高的血清抗性和抗吞噬能力，与 NTUH-K2044 的表现相似。
3. 遗传特征分析：全基因组测序表明，KP114 含有一条 5,486,094bp 的染色体和两个质粒 pKP114-vir（169506bp）、pKP114-NDM（55234bp）。pKP114-vir 与已知毒力质粒 pLVPK 和 pvir-CR-HvKP4 序列相似度高，携带多个毒力相关基因，但缺乏 IV 型分泌系统（T4SS），基因转移能力有限。pKP114-NDM 属于 IncX3 型质粒，携带 bla_NDM-1基因，包含多个与质粒复制、转移和稳定性相关的基因，以及多个耐药基因，且与多种细菌的质粒序列相似度高。
4. 抗性和毒力特征传递：通过接合实验，研究人员发现 KP114 的抗性和毒力特征能够转移到大肠杆菌 EC600 和 J53 中。获得转移的大肠杆菌对多种 β - 内酰胺类抗生素耐药，在小鼠感染实验中也表现出比受体菌更高的毒力。

研究结论和讨论部分指出，CR-hvKP 感染难以治疗，死亡率和发病率高。本次研究分离的 KP114 菌株携带多种毒力和耐药基因，具有高毒力和碳青霉烯耐药性，且通过实验证实其耐药和毒力特征可在不同菌株间转移。这一发现提示我们，必须高度重视 CR-hvKP 菌株的进化和传播，尤其是在医院环境中。虽然研究存在一些局限性，如缺乏对患者出院后的随访、仅分析了一例 CR-hvKP 病例、接合实验的转接合子数量有限等，但这一研究首次报道了宁夏地区携带 bla_NDM-1和 bla_SHV-12的 CR-hvKP 菌株，为临床监测和控制这类菌株提供了重要依据，有助于临床医生更好地应对这类危险菌株引发的感染，采取更有效的防控措施，保障患者的健康。