Broussoflavonol B：胰腺癌治疗的新希望

为探究 Bf-B 对胰腺癌的抑制作用及机制，研究人员经多实验发现其可抑制 AURKA/PLK1 通路，或成胰腺癌治疗新药物。

　　

胰腺癌治疗困境催生新探索

胰腺癌，因其高发病率和死亡率，被称为 “癌症之王”。2020 年，全球约 49.6 万例胰腺癌患者，近 46.6 万人因此离世，在欧洲，它更是癌症相关死亡的第三大主因。当前，胰腺癌的综合治疗手段，如手术、化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗虽不断发展，但患者生存率仍未得到显著提升。

细胞周期检查点在维持细胞正常分裂、防止 DNA 损伤和复制错误方面至关重要。一旦其功能异常，细胞可能会不受控制地增殖，进而引发癌症。Aurora 激酶 A（AURKA）和 Polo 样激酶 1（PLK1）属于丝氨酸 / 苏氨酸激酶家族，参与细胞分裂过程，它们的异常表达与多种肿瘤的发生发展密切相关，成为癌症研究和治疗的关键靶点。

瑞香狼毒（Daphne giraldii Nitsche）是一种具有药用价值的植物，其含有的黄酮类化合物已被证实对多种恶性肿瘤有抗癌活性，但对胰腺癌的抗癌活性及潜在药理机制尚不明确。在此背景下，大连医科大学等机构的研究人员开展研究，致力于探寻治疗胰腺癌的新策略和新药物，相关成果发表在《Cancer Cell International》。

多技术助力研究推进

研究人员运用了多种关键技术方法。通过生物信息学分析，从 The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据门户获取 RNA-seq 数据及临床信息，筛选胰腺癌差异表达基因（DEGs）；利用药物靶点预测数据库 PharmMapper 预测 Broussoflavonol B（Bf-B）的潜在靶点，并通过 Venn 图分析重叠基因，确定关键靶点。分子对接技术则用于探究 Bf-B 与靶点的结合能力，以评估其潜在作用机制。在细胞实验方面，采用 CCK8、克隆形成、划痕愈合、Transwell 迁移等多种实验评估细胞活力、增殖、迁移能力；运用流式细胞术、Hoechst 染色分析细胞周期分布和凋亡；通过蛋白质免疫印迹（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测相关蛋白和基因表达。动物实验中，构建 BALB/C 裸鼠异种移植模型，评估 Bf-B 的体内抗癌效果，并利用免疫组化、免疫荧光等技术检测相关蛋白表达。

研究结果：Bf-B 展现强大抗癌潜力

1. 黄酮类化合物结构 - 活性关系：研究人员对 25 种黄酮类化合物进行筛选，发现含异戊烯基结构的化合物对 PANC-1 胰腺癌细胞有较强抑制作用。异戊烯基数量与抗胰腺癌活性呈负相关，其位置也显著影响活性，同时，3' 位甲氧基对维持活性至关重要。Bf-B 因特定的功能基团排列（6 和 8 位异戊烯基、3 位甲氧基），展现出最强的抗胰腺癌活性。
2. 关键靶点确定：经生物信息学分析，AURKA、PLK1 和 MET 可能是 Bf-B 抑制胰腺癌进展的关键靶点。这些基因在胰腺癌肿瘤组织中高表达，且与患者疾病分期和预后相关，高表达会增加患者死亡风险。
3. 分子对接及蛋白表达影响：分子对接显示，Bf-B 与 AURKA、PLK1 的结合亲和力强于特定抑制剂，虽与 MET 结合亲和力稍弱，但也形成了稳定的氢键网络。实验证实，Bf-B 能显著降低 PANC-1 和 BXPC-3 细胞中 AURKA 和 PLK1 的蛋白和 RNA 表达，对 C-MET 蛋白表达无明显影响。
4. 对细胞增殖和迁移的抑制作用：CCK8 和克隆形成实验表明，Bf-B 能剂量依赖性地抑制 PANC-1 和 BXPC-3 细胞的活力和克隆形成能力。划痕愈合和 Transwell 迁移实验显示，Bf-B 可有效抑制这两种细胞的迁移。
5. 诱导细胞周期阻滞：基因集富集分析提示 AURKA、PLK1 和 MET 与细胞周期相关。流式细胞术分析发现，Bf-B 处理后，PANC-1 和 BXPC-3 细胞在 S 期的比例显著增加。qPCR 和 Western blot 结果显示，Bf-B 能降低细胞周期检查点激酶 ATR、CHK1、CDC25C 及细胞周期蛋白 B1（Cyclin B1）/ 细胞周期蛋白依赖性激酶 1（CDK1）的表达，影响细胞周期进程。
6. 诱导细胞凋亡：Hoechst 33342 和 Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡实验表明，Bf-B 可浓度依赖性地诱导 PANC-1 和 BXPC-3 细胞凋亡。Western blot 检测发现，随着 Bf-B 浓度增加，细胞中 P53 蛋白表达下降，但磷酸化 P53（PP53）和 P21 蛋白表达显著增加。
7. 体内抗癌效果：在裸鼠异种移植模型中，Bf-B 能显著抑制肿瘤生长，且与吉西他滨联合使用时抑制效果更显著。同时，Bf-B 对裸鼠主要器官无明显毒性，安全性良好。免疫组化和免疫荧光分析显示，Bf-B 可抑制肿瘤组织中 AURKA、PLK1 和 Ki67 的表达，诱导 DNA 损伤。
8. 对相关通路的影响：研究发现，Bf-B 直接作用于 AURKA 和 PLK1，抑制 ATR/CHK1/CDC25C 通路。联合使用 AURKA 和 PLK1 抑制剂与 Bf-B，能显著降低细胞周期检查点蛋白和细胞周期激酶的表达，增强对细胞周期的抑制作用。

研究结论与意义：开启胰腺癌治疗新篇章

本研究表明，Bf-B 是一种对胰腺癌具有强大活性的黄酮类化合物，其化学结构中异戊烯基的位置和数量对疗效起着关键作用。研究确定 AURKA 和 PLK1 为关键药物靶点，证实 Bf-B 通过抑制 AURKA 和 PLK1，下调 ATR/CHK1/CDC25C 检查点通路和 Cyclin B1/CDK1，在体内外发挥抗肿瘤作用。这一研究成果为胰腺癌的治疗提供了新的潜在药物，Bf-B 有望成为更安全、有效的胰腺癌治疗选择，尤其在与现有化疗药物联合使用时，可能增强治疗效果，且降低对正常细胞的损伤。然而，研究也存在局限性，如 Bf-B 与细胞周期检查点 ATM/CHK2 的关系及对凋亡的影响还需进一步探索。未来，随着研究的深入，Bf-B 或许能为胰腺癌患者带来新的希望，改善他们的治疗现状和生活质量。