慢性消耗病检测新突破：鹿第三眼睑或成高效诊断组织

研究人员检测自然感染白尾鹿第三眼睑中的慢性消耗病（CWD）朊病毒，发现其检测敏感性高，或可优化 CWD 监测。

　　

慢性消耗病检测的新曙光：第三眼睑的潜力挖掘

在广袤的北美大地，慢性消耗病（Chronic wasting disease，CWD）如同一场无声的瘟疫，在鹿群中肆虐蔓延。这种由朊病毒引发的致命神经退行性疾病，不仅严重威胁着鹿的种群数量和健康，还让野生动物管理部门头疼不已。截至 2025 年 1 月，美国 50 个州里已有 36 个州在自由放养的鹿群中发现了 CWD 的踪迹，一旦疫情在鹿群中站稳脚跟，其患病率可超过 50%，给鹿群数量带来灾难性的影响。而且，目前既没有针对 CWD 的疫苗，也没有有效的治疗方法，传染性朊病毒还能在环境中存活数年，使得疾病防控工作难上加难。

现有的美国农业部批准的 CWD 诊断检测，主要依赖于检测扁桃体（obex）和 / 或咽后淋巴结，然而这些组织的采集颇具挑战性，需要专业的解剖知识和熟练的操作技能，采集过程耗时费力。对于野生动物管理部门来说，扩大监测范围和提高检测效率迫在眉睫，他们急需一种更简便、高效的检测方法。在这样的背景下，研究人员将目光投向了鹿的第三眼睑，试图探索其作为 CWD 检测组织的可行性。

来自宾夕法尼亚大学兽医学院野生动物未来项目（Wildlife Futures Program）等机构的研究人员，针对自然感染 CWD 的白尾鹿，开展了一项深入研究。他们旨在探究第三眼睑能否成为可靠的 CWD 检测组织，利用实时震颤诱导转化（Real-time quaking-induced conversion，RT-QuIC）技术检测其中的 CWD 朊病毒，并验证免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）检测结果的可靠性，同时评估不同实验室间检测结果的可重复性。该研究成果发表在《Scientific Reports》上，为 CWD 的检测和防控带来了新的希望。

研究人员从宾夕法尼亚州的白尾鹿身上采集样本，这些样本涵盖了不同感染状态的鹿，包括道路上死亡的鹿、猎人捕获的鹿、自由放养的疑似患病鹿以及圈养淘汰的鹿。他们同时采集了这些鹿的第三眼睑、扁桃体和咽后淋巴结。第三眼睑的采集相对简单，只需用镊子抓住眼睛内角可见部分，向前拉动并用手术刀尽可能多地切除组织即可。采集后的样本，一部分用于 RT-QuIC 检测，一部分用于 IHC 检测，还有部分样本被送往不同实验室进行交叉验证。

在检测过程中，研究人员对第三眼睑样本进行处理和稀释，使其浓度达到合适的检测范围。然后，在 96 孔板中加入反应溶液和样本，使用 BMG FLUOstar 酶标仪进行检测，通过设定不同的增益值（Gain）来优化检测效果。同时，他们以已知感染状态的淋巴结样本作为对照，确保检测结果的准确性。对于 IHC 检测，研究人员对第三眼睑组织进行固定、切片和染色，由专业的兽医病理学家在不知 RT-QuIC 检测结果的情况下进行判读。

研究结果令人振奋。在野生动物未来项目的 RT-QuIC 实验室中，单独检测第三眼睑时，RT-QuIC 检测的敏感性达到 94%，特异性为 100%。这意味着，在 121 只经 ELISA 和 / 或 IHC 检测为 CWD 阳性的白尾鹿中，有 114 只通过 RT-QuIC 在第三眼睑组织中检测出阳性结果；而所有 129 只之前经 ELISA 和 / 或 IHC 检测为 CWD 阴性的白尾鹿，其第三眼睑的 RT-QuIC 检测结果均为阴性。当将 5 个第三眼睑样本混合为一组进行检测时，敏感性和特异性均达到 100%。这表明，混合样本检测不仅提高了检测效率，还能保证检测结果的准确性。

在实验室间交叉验证方面，两个实验室对 60 个第三眼睑样本（30 个 CWD 阳性，30 个 CWD 阴性）进行检测，结果显示两个实验室的检测敏感性均达到 97%，特异性也非常相似。虽然存在一个样本的检测结果不一致，但重新评估淋巴结的 IHC 染色结果后发现，该样本的淋巴结存在弱染色，与 CWD 阳性结果相符，这也进一步证明了 RT-QuIC 检测的高敏感性。

对于 IHC 检测第三眼睑的结果，研究发现其作为 RT-QuIC 检测阳性结果的后续确认检测具有一定的潜力，但目前还存在一些问题。由于第三眼睑的淋巴组织相对较少，且存在软骨影响切片和染色效果等因素，导致 IHC 检测的判读存在一定困难，容易出现假阳性或非特异性染色。因此，在将 IHC 检测作为 CWD 诊断工具之前，还需要进一步优化检测方法。

总的来说，这项研究表明，RT-QuIC 检测白尾鹿的单个和混合第三眼睑样本，可用于在诊断环境中检测 CWD 朊病毒，检测结果在不同实验室间具有较高的可靠性。第三眼睑作为一种替代或补充检测组织，具有诸多优势。它采集简便，无需专业解剖技能，猎人可以轻松采集，这大大减轻了野生动物管理部门的工作量和经济成本。同时，由于可以混合样本检测，实验室能够一次性检测更多样本，提高了检测效率，缩短了检测周期，有助于野生动物管理部门扩大监测范围，及时掌握 CWD 的流行情况。虽然 IHC 检测第三眼睑还需要进一步优化，但它作为 RT-QuIC 检测的补充手段，为 CWD 的诊断提供了更多的可能性。

未来，研究人员可以进一步扩大研究范围，在更广泛的地理区域开展研究，以验证第三眼睑检测的有效性。同时，优化 IHC 检测方法，提高其准确性和可靠性，使这两种检测方法更好地结合，为 CWD 的防控提供更有力的支持。相信随着研究的不断深入，我们对 CWD 的认识将更加深刻，防控措施也将更加有效。