延迟分离外周血单个核细胞对细胞活力和功能的影响：多中心研究的关键发现

研究人员为探究延长血液保存时间对 PBMC 活力和细胞毒性的影响，发现延迟分离会降低其质量和功能。

　　# 延迟分离外周血单个核细胞的研究：为精准医疗 “保鲜” 免疫细胞
在癌症治疗领域，免疫细胞就像是人体抗癌战场上的 “精锐部队”，而外周血单个核细胞（PBMCs）则是这支部队里的关键 “情报员”，它能为医生和研究人员提供患者免疫系统的重要信息，帮助制定更精准的治疗方案。近年来，随着癌症治疗手段不断革新，像针对肿瘤表面蛋白的抗体疗法以及免疫 checkpoint 抑制剂等，让人们越来越重视对免疫细胞的研究。PBMCs 因其获取相对容易，成为了极具价值的生物标志物，其表型、活性和功能都是当下科研的热门方向。

不过，在实际研究中，尤其是多中心临床试验里，处理 PBMCs 却困难重重。血液样本如果在研究现场处理，技术要求高且耗时费力；要是送到中心实验室，又会导致处理延迟。而且，血液处理过程中的各种因素，像采集方法、储存条件和处理时间等，都会影响 PBMCs 的质量，进而让研究结果的可靠性大打折扣。之前就有研究发现，延长血液保存时间会让 PBMCs 出现表型和功能的变化，但延长血液保存时间对 PBMCs 细胞质量，特别是细胞毒性的影响，还不是很清楚。所以，开展相关研究来优化血液处理流程、提高生物样本质量，就显得十分必要。

为了解开这些谜团，来自德国埃尔朗根 - 纽伦堡弗里德里希 - 亚历山大大学（Friedrich-Alexander-Universit?t Erlangen-Nürnberg）等机构的研究人员，开展了一项意义重大的研究。他们从 2021 年 7 月到 2023 年 5 月，招募了 104 位早期人表皮生长因子受体 2（HER2）阳性乳腺癌患者参与 NeoOn 试验，其中 49 位患者的数据被纳入了此次关于 PBMCs 质量的子项目研究。这项研究成果发表在了《BMC Immunology》上。

研究人员采用了几个关键技术方法来开展研究：

• PBMCs 的分离与冻存：在血液抽取后的两个时间点分离 PBMCs，分别是在 1 - 6 小时内（≤6 h PBMCs）和 20 - 30 小时后（≥20 h PBMCs）。通过密度梯度离心法，利用 Pancoll-Paque 密度梯度溶液将 PBMCs 从其他血液成分中分离出来，之后冻存备用。
• 细胞培养与分析：复苏冻存的 PBMCs 并进行过夜培养，用流式细胞术来分析细胞的活力、细胞毒性、不同细胞亚群的比例等。
• 统计学分析：使用 Graph Pad Prism 软件进行绘图和统计分析，根据数据分布情况选择合适的统计方法，判断不同组之间的差异是否具有统计学意义。

下面来看看具体的研究结果：

• PBMCs 的产量和活力：研究发现，≥20 h 分离的 PBMCs 每毫升血液中的细胞数量比≤6 h 分离的更高，但细胞活力却更低。而且，≥20 h 分离的 PBMCs 在解冻和复苏过程中细胞损失更多。
• 细胞毒性和吞噬功能：在未处理的情况下，≥20 h 分离的 PBMCs 细胞活力更低，细胞毒性和吞噬功能也明显低于≤6 h 分离的 PBMCs。加入抗体 ontruzant 后，≥20 h 分离的 PBMCs 介导的抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）和抗体依赖的吞噬作用（ADCP）也显著降低。
• T 细胞和 NK 细胞亚群：对部分患者的 PBMCs 中 T 细胞和 NK 细胞亚群分析发现，≥20 h 分离的 PBMCs 中 NK 细胞的凋亡和坏死比例更高，T 细胞的活力则没有明显差异。

在研究结论和讨论部分，研究人员指出，延迟分离 PBMCs 会对细胞质量和功能产生负面影响，尤其是 NK 细胞的活力和功能。虽然延长血液保存时间会增加 PBMCs 的产量，但这可能是粒细胞污染导致的，粒细胞污染会影响样本质量。而且，PBMCs 分离时间的不同，对细胞活力、功能的影响差异显著，这在设计相关实验时需要重点考虑。

这项研究意义重大，它强调了及时处理血液样本对保证 PBMCs 质量的重要性。在临床试验中，记录血液采集和 PBMCs 分离之间的时间至关重要，这样才能建立标准，保证样本质量的均一性。未来，还需要进一步研究这些差异背后的机制，探索在延长储存时间的情况下，如何保持 PBMCs 的完整性。相信随着研究的深入，PBMCs 在癌症治疗研究和临床实践中的应用会更加可靠和有效。