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为解决牛奶中 BLG 致过敏问题，研究人员用 CBEs 开展相关研究，成功降低奶牛 BLG 表达，助力低敏乳制品开发。
β- 乳球蛋白（BLG）是牛奶中存在的一种过敏原，能在某些个体中诱发急性免疫反应。胞嘧啶碱基编辑器（CBEs）的成功应用可以在提前的信使核糖核酸（mRNA）中引入终止密码子，进而培育出基因被破坏的动物，这些基因原本对目标性状起到负调控作用。在这项研究中，研究人员采用 CBE 系统，以奶牛胚胎、乳腺上皮细胞和活体奶牛中的主要牛奶过敏原 BLG 为靶点开展研究。首先，通过设计有效的单向导核糖核酸（sgRNA），在奶牛胚胎的 BLG 基因编码区诱导 c.61C>T 替换，将第 21 位谷氨酰胺密码子（p.21Gln）转变为提前终止密码子，实现了 BLG 基因的精确单碱基编辑。桑格测序显示，编辑效率达到 83.3%（24 个胚胎中有 20 个），其中包含两个纯合编辑。其次，利用相同的 CBE 系统构建了携带 BLG 编辑的奶牛乳腺上皮细胞系。测序结果表明，设计的 sgRNA1 能够使三个连续的胞嘧啶（c.59 - 61CCC）同时转变为胸腺嘧啶（TTT）。在 c.61 位点，单细胞克隆呈现单等位基因或双等位基因编辑（BLGc.61C>T），在 c.59 和 c.60 位点为单等位基因编辑（CC>TT）。基因表达分析证实，即使在单等位基因编辑的细胞中，BLGc.61C>T突变也能在信使核糖核酸（mRNA）和蛋白质水平有效抑制 BLG 的表达。最后，研究人员成功培育出杂合 BLGc.61C>T单碱基编辑奶牛，尽管该奶牛为杂合子，但其乳腺上皮细胞和牛奶中的 BLG 表达显著降低。总体而言，这项研究证明了利用 CBEs 破坏奶牛中 BLG 表达的可行性，为生产低敏乳制品的应用奠定了基础。
