新突破！中国团队成功建立第三种人肝细胞 - 胆管细胞癌联合细胞系 CHC-X1

为探究联合肝细胞 - 胆管细胞癌（cHCC-CCA），研究人员建立 CHC-X1 细胞系，其或助力治疗研究。

　　联合肝细胞 - 胆管细胞癌（combined hepatocellular-cholangiocarcinoma，cHCC-CCA）是一种侵袭性很强的原发性肝癌，它就像隐藏在肝脏里的 “双面杀手”，同时具备肝细胞和胆管细胞的分化特征。这种癌症比较罕见，在原发性肝癌中所占比例仅为 0.77 - 1.8%，但实际发病率可能更高，因为很多没做手术或穿刺活检的患者常常被误诊为肝细胞癌或肝内胆管癌。它可出现在各个年龄段，不过在中老年人中更为常见，而且男性患者比女性多。更糟糕的是，cHCC-CCA 的整体预后较差，比肝细胞癌还要糟糕，和肝内胆管癌相比，其预后情况也存在争议。目前，根治性肝切除术是首选治疗方法，但由于这种病侵袭性强、术后复发率高，很多患者还是免不了要进行全身辅助治疗。然而，因为病例少、缺乏临床试验，标准化的辅助治疗方案一直没能建立起来。

在肿瘤研究领域，肿瘤细胞系（CLs）就像是一把重要的 “钥匙”，能在一定程度上反映肿瘤的特点，是研究肿瘤最常用的模型之一。过去几十年，它大大推动了人们对肿瘤生物学的理解，还帮助研发了不少抗肿瘤药物。可让人遗憾的是，目前文献报道的人 cHCC-CCA 细胞系只有两个（KMCH-1 和 KMCH-2），而且都来自日本患者。所以，建立新的 cHCC-CCA 细胞模型对推进更有效的治疗方法至关重要。

为了解决这些难题，兰州大学第一医院等机构的研究人员开展了一项重要研究。他们成功建立了一种稳定的 cHCC-CCA 细胞系，命名为 CHC-X1。这一成果发表在《BMC Cancer》上，为 cHCC-CCA 的研究带来了新的曙光。

研究人员在开展这项研究时，运用了多种关键技术方法。首先，从患者手术切除的肿瘤组织获取样本，严格遵循医学伦理规范，患者均签署了知情同意书。接着，对肿瘤组织进行处理，分离并培养原代细胞。通过短串联重复（STR）序列分析来确定细胞系与原发肿瘤组织的关系；运用细胞增殖实验、核型分析、肿瘤球形成实验、类器官培养等技术，深入探究细胞的生物学特性；还利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察细胞的超微结构；进行药物敏感性测试，评估细胞对不同药物的反应；通过将细胞接种到 NXG 小鼠体内，开展异种移植瘤形成实验。

下面来看看具体的研究结果：

• CHC-X1 细胞系的建立和形态特征：通过原代培养和传代培养，成功建立了 CHC-X1 细胞系，该细胞系已在体外培养超 20 个月，传代超 100 代，并保存于中国典型培养物保藏中心。在倒置显微镜下，CHC-X1 细胞呈现贴壁生长，具有典型的上皮样外观，细胞间失去接触抑制，形态多样，有不规则多边形、纺锤形、圆形和椭圆形等，细胞核明显，还能看到多核巨细胞。而且，CHC-X1 细胞复苏后活力高，经过多次传代，细胞系特征依然稳定。
• 短串联重复序列分析：STR 分析表明，CHC-X1 细胞的 STR 图谱与 Cellosaurus 细胞库中记录的所有细胞系都不同，但与原始肿瘤组织的 STR 图谱几乎完全一致，这就有力地证明了 CHC-X1 是一种源自原始肿瘤组织的新型人源细胞系。
• 细胞增殖实验：CHC-X1 细胞在含有 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基中能稳定增殖，其群体倍增时间为 50.72h 。
• 核型分析：对 CHC-X1 细胞进行核型分析发现，其核型复杂，近 83% 的细胞为三倍体，近 17% 为六倍体，同时存在染色体数目和结构异常。
• 肿瘤球形成实验和类器官培养：在低附着条件和无血清培养基中，CHC-X1 细胞能形成大量结构良好的肿瘤球，随着时间推移，肿瘤球的数量和大小都在增加。将 CHC-X1 细胞接种到基质胶（Matrigel）中，10 天内就能快速形成肿瘤样器官，培养时间越长，类器官体积越大，边缘还能观察到出芽生长现象。
• CHC-X1 的超微结构：扫描电子显微镜显示，CHC-X1 细胞呈球形，有许多片状和丝状突起向外延伸，还有不少向外突出的小泡，这表明其具有较强的侵袭性。透射电子显微镜下，CHC-X1 细胞的细胞核大，核仁边缘聚集明显，细胞质成分相对较少，但富含内质网、核糖体、不规则肿胀的线粒体和较多溶酶体。
• 药物敏感性测试：评估 CHC-X1 细胞对奥沙利铂、5 - 氟尿嘧啶、吉西他滨和紫杉醇的敏感性，结果显示 CHC-X1 细胞对紫杉醇敏感，对奥沙利铂、5 - 氟尿嘧啶和吉西他滨耐药。
• NXG 小鼠异种移植瘤形成实验：将 CHC-X1 细胞接种到 NXG 小鼠皮下，4 周后，有 67% 的小鼠成功形成皮下异种移植瘤，且在小鼠的肝、肺组织中未发现转移位点。
• H&E 染色和免疫组化（IHC）染色：H&E 染色显示，原始肿瘤的肝组织正常结构被破坏，癌细胞形态多样。IHC 染色表明，CHC-X1 细胞、移植瘤和原发肿瘤均表达胆管细胞标记物 CK7、CK19，以及肝细胞标记物 Arg - 1、Alb、AFP 和 Glypican - 3 等，这在一定程度上证明了三者的同源性 。

综合来看，研究人员建立的 CHC-X1 细胞系是世界上继 KMCH-1 和 KMCH-2 之后的第三种 cHCC-CCA 细胞系，也是首个源自中国患者的该类细胞系。它同时表达肝细胞和胆管细胞的相关标记物，为研究 cHCC-CCA 的起源提供了有力依据。CHC-X1 细胞系对不同药物的敏感性与之前临床研究结果存在差异，这有助于研究人员探索 cHCC-CCA 的耐药相关基因或代谢途径。此外，CHC-X1 细胞能在 NXG 小鼠皮下形成移植瘤，为体内实验研究提供了可能。不过，该研究也存在一定局限性，只对 CHC-X1 细胞系进行了鉴定和分析，后续还需要建立更多新的细胞系并开展测序分析，从而更深入地了解 cHCC-CCA 的发生、发展和耐药机制。但不可否认的是，CHC-X1 细胞系的建立为 cHCC-CCA 的研究搭建了一个全新的实验平台，在未来探索这种疾病的治疗新策略方面，有望发挥重要作用 。