犬肥大细胞瘤免疫微环境的肿瘤间异质性：探索预后与治疗新方向

为探究犬肥大细胞瘤（MCTs）免疫肿瘤微环境（TME），研究人员分析低、高级别 MCTs 的免疫转录谱，发现两者有显著差异，为后续研究提供依据。

　　犬皮肤肥大细胞瘤（MCTs）在兽医临床上是常见却又极具挑战的肿瘤类型。它在犬类皮肤肿瘤中占比 16 - 21%，是最常被诊断出的皮肤肿瘤。这些肿瘤的生物学行为差异很大，有的生长缓慢，通过手术切除就能治愈；而有的即便经过积极的综合治疗，仍会快速局部扩散和远处转移。

目前，虽然组织学分级是预测 MCTs 预后最有用的指标，但对其潜在的病理机制了解不足，影响了临床决策。对于高级别 MCTs 患者，尽管通常预后较差，但仍有部分患者在明确治疗后能长期存活。因此，深入了解是什么导致 MCTs 的侵袭性行为，并找到潜在的治疗靶点，成为了亟待解决的问题。

在人类肿瘤学领域，对免疫肿瘤微环境（TME）的研究揭示了多种肿瘤组织学类型的预后相关数据和治疗相关生物标志物。受到这些成果的启发，宾夕法尼亚大学兽医学院的研究人员开展了一项研究，旨在比较低级别和高级别 MCTs 免疫 TME 的转录差异，并对 TME 内的 T 细胞浸润进行量化分析。该研究成果发表在《Veterinary Oncology》上。

研究人员在研究中使用了多种关键技术方法。首先，通过检索电子病历系统和诊断实验室数据库，选取了 12 只患有皮肤 MCTs 的犬，这些犬均在宾夕法尼亚大学马修?J?瑞安兽医医院接受过手术切除。接着，对肿瘤组织进行 RNA 提取，利用 NanoString 犬免疫分析面板进行免疫转录谱分析，并借助 ROSALIND 平台处理数据。同时，采用免疫组织化学染色检测 CD3 来确定 T 细胞密度，使用 ImageScope 软件进行量化；还对一个高级别 MCT 的 TME 进行共免疫荧光染色，进一步表征淋巴细胞浸润情况。

研究结果如下：

1. 临床特征与分组：12 只犬中，6 只低级别 MCTs 犬和 6 只高级别 MCTs 犬在年龄、性别、品种等方面无显著差异。低级别 MCTs 犬的无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）显著长于高级别 MCTs 犬，且高级别肿瘤的有丝分裂计数明显更高，这表明研究选取的两组 MCTs 具有明显不同的临床结局。
2. 转录谱差异：研究发现了 9 个差异表达基因（DEGs）。与低级别肿瘤相比，诱导性 T 细胞共刺激配体（ICOSLG）、程序性细胞死亡蛋白 1（PDCD1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2C（CDKN2C）和乳腺癌 1 号基因（BRCA1）在高级别肿瘤中总体表达增加；而上皮间质相互作用蛋白 1（EPSTI1）、雌激素受体（ESR1）、Thy - 1（THY1）、人表皮生长因子受体 2/neu（ERBB2）和端锚聚合酶（TNKS）则在高级别肿瘤中总体表达降低。这揭示了低级别和高级别犬 MCTs 的 TME 存在显著转录差异。
3. T 细胞浸润情况：ICOSLG 与转录 T 细胞评分呈中度显著正相关，PDCD1 与转录 T 细胞评分也有类似趋势，但不显著。虽然低级别和高级别肿瘤的转录 T 细胞评分及 CD3 + T 细胞密度无显著差异，但高级别 MCTs 的转录 T 细胞评分和免疫组化 T 细胞密度的方差更大。此外，在一个高级别肿瘤中发现了类似三级淋巴结构（TLS）的淋巴细胞聚集，该肿瘤的 ICOSLG 和 PDCD1 转录水平最高。这表明犬 MCTs 的 TME 存在可变的 T 细胞炎症，且不同高级别 MCTs 的 T 细胞浸润差异较大。

在结论与讨论部分，研究表明低级别和高级别犬皮肤 MCTs 的免疫 TME 存在显著差异。低级别 MCTs 在免疫 TME 的转录水平和 T 细胞炎症程度上表现出较低的异质性，而高级别 MCTs 则存在更大的变异性。在高级别 MCTs 中，部分肿瘤表现出 ICOSLG 和 PDCD1 表达增加，这为进一步研究免疫检查点在犬肥大细胞疾病中的功能和潜在治疗靶点提供了理论依据。

不过，该研究也存在一些局限性，如治疗方案的异质性和缺乏标准化的随访。后续需要更大规模的前瞻性临床研究来验证这些发现，并深入探讨转录结果与组织学和临床变量之间的关系。尽管如此，这项研究为犬 MCTs 的治疗和预后判断开辟了新的方向，有望推动相关领域的进一步发展，为犬类健康带来新的希望。