m6A 修饰的 LINC02418：结直肠癌治疗的新靶点

为探究 LINC02418 在结直肠癌（CRC）中的作用，研究人员发现其可促进 CRC 进展，有望成治疗靶点。

　　结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）作为全球范围内发病率和死亡率居高不下的恶性肿瘤，严重威胁着人类健康。每年新增病例超过 180 万，且年轻群体中的发病率呈显著上升趋势。由于多数患者确诊时已处于晚期，导致死亡率居高不下。尽管目前 CRC 的治疗手段取得了一定进展，但患者的预后情况仍不理想。因此，深入了解 CRC 细胞进展和侵袭的分子机制，对于开发基于生物标志物的个性化治疗策略至关重要。

哈尔滨医科大学附属第二医院的研究人员开展了关于 LINC02418 在结直肠癌中作用的研究，相关成果发表在《Cell Death Discovery》上。该研究揭示了 LINC02418 在 CRC 中的关键作用及机制，为 CRC 的治疗提供了新的潜在靶点，有望推动个性化治疗策略的发展。

研究人员运用了多种关键技术方法。在样本获取方面，从哈尔滨医科大学附属第二医院收集了人类 CRC 组织和相邻的非恶性组织。实验技术上，利用 RNA 免疫沉淀（RIP）、甲基化 RNA 免疫沉淀（MeRIP）、RNA 下拉实验（RNA pull - down）、RNA 免疫沉淀（RIP）和染色质免疫沉淀（ChIP）等实验，探究分子间的相互作用和修饰情况；通过双荧光素酶报告基因实验（luciferase reporter assay）评估转录活性；运用定量实时聚合酶链反应（qPCR）、蛋白质免疫印迹（western blot）检测基因和蛋白的表达水平；还借助细胞增殖、克隆形成、Transwell 迁移和侵袭实验，以及动物实验中的皮下异种移植和肺转移模型，研究 LINC02418 对 CRC 细胞生物学行为的影响。

研究结果如下：

• LINC02418 在结直肠癌中高表达且与不良临床结局相关：研究人员分析多个数据库发现，LINC02418 在 CRC 组织中显著上调，且高表达与无进展生存期不良相关。对 10 对组织样本进行 qPCR 验证，进一步证实了这一结果。此外，在 CRC 细胞系中也观察到 LINC02418 表达升高，且其在细胞核和细胞质中均有分布。
• LINC02418 敲低抑制结直肠癌细胞的增殖和转移：在体外实验中，研究人员通过短发夹 RNA（shRNA）敲低 RKO 和 HCT116 细胞中的 LINC02418 表达，结果显示细胞生长速率、克隆形成能力、迁移和侵袭能力均显著下降；而过表达 LINC02418 则产生相反效果。在体内实验中，利用皮下异种移植和肺转移模型发现，敲低 LINC02418 显著抑制了肿瘤的生长和转移，表现为肿瘤体积和重量减小，Ki - 67 表达及上皮 - 间质转化（EMT）相关标记物减少，肺转移结节数量和肺重量降低。
• m⁶A 修饰参与结直肠癌中 LINC02418 的上调：生物信息学分析预测 LINC02418 存在 m⁶A 修饰位点，且与甲基转移酶样 3（METTL3）相关。研究发现，METTL3 在 CRC 组织中高表达，且与 LINC02418 表达呈正相关。敲低 METTL3 可降低 LINC02418 的表达、m⁶A 修饰水平及稳定性。生存分析表明，高 LINC02418 m⁶A 修饰水平的患者总生存期更差。
• LINC02418 在结直肠癌中对 Wnt 通路起正向调节作用：基因集富集分析（GSEA）显示 LINC02418 与 Wnt 信号通路呈正相关。qPCR 和 western blot 分析表明，过表达 LINC02418 可上调 β - 连环蛋白（β - catenin）及 Wnt/β - catenin 信号通路靶基因的 mRNA 和蛋白水平；敲低 LINC02418 则导致这些基因表达下降。
• LINC02418 通过与 YBX1 相互作用促进 CTNNB1 的转录：预测 LINC02418 可能与 YBX1 等蛋白相互作用，后续实验证实了两者的相互作用。YBX1 在 CRC 组织中高表达，可结合到 CTNNB1（编码 β - catenin）的启动子区域并激活其转录。LINC02418 通过增强 YBX1 与 CTNNB1 启动子的结合能力，促进 β - catenin 的转录，进而激活 Wnt 通路。
• LINC02418 通过与 IGF2BP1 相互作用增加 CTNNB1 的稳定性：研究发现 LINC02418 可与胰岛素样生长因子 2 mRNA 结合蛋白 1（IGF2BP1）相互作用，IGF2BP1 在肿瘤组织中高表达且与患者总生存期较差相关。敲低 IGF2BP1 可下调 CTNNB1 的 mRNA 水平并降低其稳定性，LINC02418 缺失会减弱 IGF2BP1 与 CTNNB1 mRNA 的相互作用，而过表达 IGF2BP1 可抵消 shLINC02418 对 CTNNB1 mRNA 稳定性的影响。
• CTNNB1 过表达逆转 LINC02418 敲低对结直肠癌细胞的影响：通过转染实验，在敲低 LINC02418 的 CRC 细胞中过表达 CTNNB1，结果显示细胞增殖和迁移能力得到恢复，Wnt 信号通路靶基因的表达也被逆转，表明 LINC02418 通过 CTNNB1 发挥其生物学功能。
• YBX1 可结合到 LINC02418 启动子并诱导其转录：JASPAR 分析发现 YBX1 可结合到 LINC02418 启动子区域。实验表明，敲低 YBX1 可降低 LINC02418 的表达，过表达 YBX1 则使其表达增加。双荧光素酶报告基因实验和 ChIP 实验进一步证实了 YBX1 对 LINC02418 转录的促进作用。

研究结论和讨论部分指出，该研究首次揭示了 LINC02418 激活 Wnt 信号通路在 CRC 中的关键作用，其通过与 YBX1 和 IGF2BP1 相互作用，在转录和转录后水平调控 CTNNB1 的表达。同时，明确了 METTL3 介导的 m⁶A 修饰增强 LINC02418 稳定性，以及 YBX1 促进 LINC02418 转录的上游调控机制。LINC02418 有望成为 CRC 诊断和预后的生物标志物，针对 LINC02418 的治疗策略，如反义寡核苷酸和 RNA 干扰（RNAi）介导的基因沉默等，可能为 CRC 的治疗提供新的方向，对推动 CRC 个性化治疗的发展具有重要意义。