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为探究弥漫大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）中与 CAR-T 疗效相关因素，研究发现 MYC 网络与 CD8+T 细胞减少有关，联合用药有协同效果。
弥漫大 B 细胞淋巴瘤（Diffuse Large B-cell Lymphoma，DLBCL）作为最常见的淋巴瘤，是一种基因组高度异质性的疾病。目前，一线免疫化疗方案如 R-CHOP（利妥昔单抗联合环磷酰胺、长春新碱、多柔比星和泼尼松）以及新兴的泊洛妥珠单抗（Polatuzumab Vedotin）组合疗法，虽能使超 60% 的患者实现长期缓解，但对于难治性或复发性疾病（rrDLBCL）患者，尤其是确诊后 24 个月内出现病情进展的患者，预后依旧不容乐观。
肿瘤靶向嵌合抗原受体 T 细胞（Chimeric Antigen Receptor Cells，CAR-T）疗法的出现，显著提高了 rrDLBCL 患者的无进展生存率，给这一群体带来了新希望。然而，由于 CAR-T 疗法存在生物学和经济毒性，精准识别哪些患者无法从中获益至关重要，这有助于临床医生为患者探寻个性化的治疗方案。此前研究虽已对 DLBCL 的基因组景观进行了多方面探索，但 MYC 基因改变、肿瘤微环境（Tumor Microenvironment，TME）特征与 CAR-T 疗效之间的关系仍未完全明晰，且针对相关机制的靶向治疗策略也有待进一步研究。
基于此，明尼苏达州立大学曼卡托分校（Minnesota State University Mankato）的研究人员开展了相关研究。该研究成果发表在《Annals of Hematology》上，为深入理解 DLBCL 的发病机制和治疗策略提供了重要依据。
研究人员整合多种公开数据，包括来自 4 项研究的 246 例患者队列以探究 MYC 改变与 CD19 靶向 CAR-T 治疗失败的关系，以及包含 418 例患者临床、DNA 和基因表达数据的数据集等。同时，对 7 例 DLBCL 患者的单细胞 RNA（single-cell RNA，scRNA）数据进行分析，并使用多种生物信息学工具和实验技术进行基因表达分析、免疫浸润评估和细胞系实验。
研究结果显示：
- High/Altered MYC 与 CAR-T 疗效及免疫调节基因缺失相关：研究人员分析发现，存在 MYC 改变的患者在接受 CD19 靶向 CAR-T 治疗时，疾病进展率更高。在对 418 例初治 DLBCL 患者数据集的分析中，High/Altered MYC 患者与正常 MYC 患者相比，多种免疫调节基因显著缺失，且这些基因的变化与 24 个月无事件生存期（EFS24）失败及 CAR-T 无应答相关。此外，在 High/Altered MYC 患者中，关键 T 细胞激活和调节基因，如 CD8A、CD28、IL7R、STAT1、CD58 和 IRF1 等表达显著降低，同时还发现一些与 MYC 共发生改变的基因，表明 MYC 异常并非孤立存在。
- CD8+T 细胞缺失与 CAR-T 失败和高 MYC 表达相关：通过对初治和 rrDLBCL 基因表达数据集的免疫反卷积分析，发现 High/Altered MYC 初治患者和 CAR-T 无应答患者中 CD8+T 细胞的存在显著降低。CD8+T 细胞缺失在初治 DLBCL 患者中较为普遍，且与 High/Altered MYC 和 EFS24 失败呈正相关。在 CD8+T 细胞缺失的患者群体中，还观察到癌基因和 DNA 修复成分的显著增加。
- CD8+T 细胞缺失和 High/Altered MYC 共同存在与不良预后相关：研究人员进一步分析发现，同时存在 CD8+T 细胞缺失和 High/Altered MYC 的初治 DLBCL 患者，与其他患者相比，总体生存期明显较差。这类患者中癌基因相互作用增加，T 细胞发育相关途径和基因相互作用显著丧失，MYC 表达与关键 T 细胞激活基因呈显著负相关。
- scRNA 分析揭示 MYC 表达与多种途径相关：对恶性 B 细胞中 MYC 表达的相关性分析表明，MYC 与细胞增殖、存活、生长因子相关途径以及多种细胞因子产生途径呈正相关。同时，在 scRNA 数据中发现，高 MYC 表达的患者 T 细胞数量较少，且 MYC 表达与 T 细胞存在和激活相关。
- 联合用药有效抑制 DLBCL 细胞系活力：鉴于 MYC 状态与初治结局和 CAR-T 疗效的密切关系，研究人员应用 CDK9 抑制剂 AZD4573 和 XPO1 抑制剂塞利尼索（Selinexor）处理 DLBCL 细胞系。结果显示，这两种药物单独使用时就能显著降低细胞系活力，联合使用时对 6 种 DLBCL 细胞系均产生协同抑制效果。
综上所述，该研究揭示了 MYC 改变、CD8+T 细胞缺失与 CAR-T 疗效之间的紧密联系，为 DLBCL 的分子发病机制提供了新的见解。同时，研究表明联合使用 AZD4573 和塞利尼索对 DLBCL 细胞系具有协同抑制作用，为 rrDLBCL 患者提供了一种潜在的个性化治疗方案。然而，该研究也存在一定局限性，如需要在更多大型数据集上进行验证，未充分整合患者年龄、分期等临床因素，细胞系实验结果需进一步在体内模型中验证，药物的安全性和有效性也需更多研究。未来研究可针对这些方面展开，以进一步优化 DLBCL 的治疗策略。
研究人员在开展研究时，主要运用了以下关键技术方法：
- 数据整合与分析：整合多个公开的 DLBCL 相关数据集，包括患者的临床数据、DNA 改变信息和基因表达数据，进行综合分析。
- 单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）：对 7 例 DLBCL 患者的 scRNA 数据进行处理和分析，探究 MYC 表达与细胞生物学途径的关系。
- 生物信息学分析：利用多种生物信息学工具，如 Broad Institute 的 GenePattern 套件、ToppFunn 功能富集工具和 UCLA 的 Gene Expression Deconvolution Interactive Tool（GEDIT）等，进行差异基因表达分析、基因本体分析、免疫反卷积分析和细胞状态及生态型分类。
- 细胞系实验：使用多种 DLBCL 细胞系，进行单药及联合用药处理，通过 Alamar Blue viability reagent 检测细胞活力，评估药物疗效。
