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研究人员建立 C30 反相 HPLC 法测定当归中 D 和 DA，发现二者活性差异，利于当归质量控制。
# 当归活性成分研究：突破分离难题，解锁药理新发现
在传统医学的宝库里，当归（Angelica gigas，AGR）一直占据着重要地位。在韩国，它常被用于治疗贫血、不育、胃病和关节炎等多种疾病；在美国，其乙醇提取物作为膳食补充剂，用于增强记忆力和缓解疼痛。当归中的主要成分 Decursin（D）和 Decursinol Angelate（DA）属于香豆素类化合物，不仅是区分韩国当归与中国当归、日本当归的标志性成分，韩国药典还规定，AGR 中所含的 Nodakenin、总 Decursin（D 和 DA）之和，按干燥品计算，不得少于 6% 。
然而，D 和 DA 这对 “孪生兄弟”，由于具有相同的化学式，是结构异构体，分离和定量测定面临巨大挑战。以往常用的 C18 反相柱 HPLC 法，难以将它们完全分离，分辨率欠佳，分析时间还长，这使得在当归质量控制方面困难重重。同时，虽然二者结构相似，但在生物活性上却可能存在差异，却因分离问题难以深入探究。因此，建立一种高效可靠的分析方法，对当归的质量把控和合理应用至关重要。
为攻克这些难题，来自韩国忠南大学药学院、庆北国立大学药学院等机构的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Heliyon》杂志上，为当归的研究和应用开辟了新道路。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：一是高效液相色谱（HPLC）分析，通过比较不同的反相柱，筛选出最适合分离 D 和 DA 的柱子；二是细胞实验，利用 HT22 细胞（小鼠来源的海马神经元细胞系）和 Raw264.7 细胞（巨噬细胞系），分别评估 D 和 DA 的神经保护和抗炎活性 。
研究结果
- HPLC 方法开发：研究人员对比了 Gemini 5 μm C18 110 ?、Capcell Pak UG120（均为 C18 柱）和 YMC Carotenoid S-5 μm（C30 柱）三种反相柱。结果显示，C30 柱表现出色，能将 D 和 DA 很好地分离，分辨率达到 2.44，峰不对称性为 0.97，且分析物保留时间更短。而 C18 柱分离效果不佳，分辨率低于 1.5。此外，基于 C30 柱的 HPLC 方法在经过线性、检测限（LOD）、定量限（LOQ）、精密度和准确度等验证后，各项指标良好，表明该方法可靠，可用于样品中 D 和 DA 的测定。
- AGR 中 D 和 DA 的定量分析：运用已验证的 HPLC 方法，研究人员分析了在 Jinbu 地区种植的 AGR 提取物中 D 和 DA 的含量，发现 D 含量为 44.9 ± 0.2 mg/g 干重（4.5%） ，DA 含量为 38.8 ± 0.2 mg/g 干重（3.9%） 。与以往研究相比，此次测定的含量更高，这得益于 C30 柱的高分辨率，能更准确地测定。同时，研究还指出，不同种植地、提取方法和分析方法会导致 AGR 中 D 和 DA 含量差异较大 。
- D 和 DA 神经保护作用比较：在 HT22 细胞实验中，研究人员发现，D 能有效恢复谷氨酸诱导的细胞死亡，50 μM 的 D 使细胞活力显著提高，细胞形态相对健康，细胞内乳酸脱氢酶（LDH）泄漏明显减少。而 DA 的神经保护作用则微乎其微。这表明在对抗谷氨酸诱导的 HT22 细胞死亡方面，D 的效果远超 DA。
- D 和 DA 抗炎作用比较：在 Raw264.7 细胞实验中，研究人员先通过细胞活力测定确定了 D 和 DA 的合适浓度范围为 10 - 40 μM。结果显示，LPS 诱导的一氧化氮（NO）升高，能被 D 和 DA 浓度依赖性地抑制。40 μM 的 D 和 DA 都能显著降低 NO 水平，二者效果相似，且细胞形态也在 D 和 DA 处理后得到有效恢复。这说明在 LPS 刺激的 Raw264.7 细胞中，D 和 DA 的抗炎活性相近。
研究结论与意义
本研究成功建立了一种基于 C30 柱的简单快速的 HPLC 方法，可用于当归中 D 和 DA 的完全分离和定量测定。利用该方法，研究人员准确测定了 Jinbu 地区种植的当归中 D 和 DA 的含量，为当归质量控制提供了可靠手段。同时，研究发现 D 和 DA 在神经保护和抗炎方面的活性存在差异，D 在神经保护方面表现突出，而二者在抗炎方面效果相似。这一发现不仅有助于深入了解当归的药理作用机制，也为基于当归活性成分的药物开发提供了重要依据，凸显了精确分析 D 和 DA 含量对当归质量控制和合理应用的重要性 。
此次研究成果为当归的研究和应用带来了新的突破，高效的分离方法和对活性成分的深入了解，将推动当归在医药领域的进一步开发和利用，有望为相关疾病的治疗提供更有效的药物和方案。
