突破！发现 NMO-IgG 诱导原发性视网膜损伤新机制，为治疗带来新希望

研究人员为探究 NMO-IgG 诱导视网膜病变机制，开展相关研究，发现其可致原发性视网膜损伤，为治疗提供新靶点。

　　在神经免疫领域，视神经脊髓炎谱系障碍（Neuromyelitis Optica Spectrum Disorder，NMOSD）一直是个棘手的难题。NMOSD 是一种主要由针对水通道蛋白 4（Aquaporin 4，AQP4）的自身抗体（NMO-IgG）驱动的神经免疫疾病，患者常常遭受视神经和脊髓受损的痛苦。然而，关于 NMO-IgG 诱导视网膜病变的机制却一直迷雾重重。此前研究虽发现 AQP4 在视网膜穆勒细胞（Müller cells）中高表达，但 NMO-IgG 究竟如何与之相互作用并引发视网膜炎症，尚未明确。而且，临床研究中也难以判断 NMOSD 患者视网膜病变是原发性的，还是由视神经病变继发而来。为了揭开这些谜团，中国人民解放军总医院等机构的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Journal of Neuroinflammation》上，为理解 NMOSD 视网膜病变机制和开发新疗法带来了新曙光。

研究人员为了开展此项研究，运用了多种关键技术方法。首先，从临床患者获取样本，收集了 4 名健康对照者和 4 名 AQP4-IgG 血清阳性的 NMOSD 患者的血液样本，纯化出 NMO-IgG 和健康对照 IgG（HC-IgG）。然后，采用动物实验，将 6 - 8 周龄的雌性 C57BL/6 小鼠作为实验对象，对小鼠进行玻璃体内注射。同时，运用光学相干断层扫描（Optical Coherence Tomography，OCT）、闪光视觉诱发电位（Flash Visual Evoked Potential，f-VEP）、视网膜电图（Electroretinography，ERG）等技术评估视网膜功能变化。还利用实时荧光定量 PCR（Real-time Fluorescence Quantitative PCR，RT-qPCR）和免疫荧光分析等手段，从分子和细胞层面探究相关机制。

研究结果如下：

1. NMO-IgG 诱导视网膜 AQP4 丢失：玻璃体内注射 NMO-IgG 后，免疫荧光显示其在视网膜沉积，尤其在血管周围，同时穆勒细胞中 AQP4 表达显著降低，但视神经中 AQP4 表达无变化。这表明 NMO-IgG 可特异性作用于视网膜，影响 AQP4 表达。
2. 引起视网膜血管渗漏和厚度改变：通过 Evans Blue 实验发现，NMO-IgG 注射 7 天后，视网膜血管出现渗漏，且部分在 14 天后仍未完全恢复。OCT 和 H&E 染色结果显示，注射 7 天后视网膜厚度增加，特别是视网膜神经纤维层（Retinal Nerve Fiber Layer，RNFL）、内丛状层（Inner Plexiform Layer，IPL）和外丛状层（Outer Plexiform Layer，OPL），到 21 天时 RNFL 厚度又显著下降。
3. 导致 RGC 损失和视觉功能障碍：免疫荧光染色显示，注射 21 天后 NMO-IgG 组视网膜神经节细胞（Retinal Ganglion Cells，RGCs）密度明显降低。ERG 和 f-VEP 检测结果表明，随着时间推移，NMO-IgG 组视网膜功能逐渐受损，b 波振幅下降等，证实了 NMO-IgG 会影响视网膜功能，进而导致视觉障碍。
4. 小胶质细胞炎症参与视网膜病变：NMO-IgG 处理穆勒细胞系 MIO-M1 后，AQP4 表达下降，补体 C3 mRNA 表达升高。体内实验发现，NMO-IgG 注射后小胶质细胞被激活，形态发生改变，iNOS 表达增加。利用 CSF1 受体拮抗剂 PLX3397 清除小胶质细胞后，显著减轻了 NMO-IgG 诱导的 RGC 损失，说明小胶质细胞在 NMO-IgG 诱导的视网膜病变中起重要作用。
5. 穆勒细胞来源的补体 C3 激活小胶质细胞：RT-qPCR 和免疫荧光染色显示，NMO-IgG 注射后，视网膜中补体 C3 表达在第 7 天达到峰值，且主要由穆勒细胞产生。这表明 NMO-IgG 诱导 AQP4 内化后，会促使穆勒细胞产生补体 C3，进而激活小胶质细胞。
6. 小胶质细胞的 C1q 对 RGCs 具有神经毒性：在 NMO-IgG 处理的视网膜中，C1q mRNA 水平在第 7 天显著升高，且小胶质细胞中可检测到 C1q 蛋白。体外实验表明，C1q 可诱导 RGCs 损伤，而 C1q 中和抗体 ANX005 能减轻这种损伤，说明小胶质细胞产生的 C1q 在 NMO-IgG 诱导的视网膜病变中对 RGCs 具有神经毒性。

研究结论和讨论部分指出，NMO-IgG 通过补体非依赖途径诱导原发性视网膜病变，小胶质细胞激活在其中起关键作用。穆勒细胞来源的补体 C3 是小胶质细胞释放 C1q 的上游因子，限制小胶质细胞激活有望成为治疗 NMO-IgG 诱导视网膜病变的新靶点。不过，该研究也存在一些局限性，如 NMO-IgG 在视网膜的长期影响尚不明确，实验结果无法完全排除星形胶质细胞的作用等。但总体而言，这项研究为理解 NMOSD 视网膜病变机制提供了重要依据，为后续治疗策略的开发指明了方向，对推动神经免疫疾病治疗的发展具有重要意义。